TAK-632

N. catalogoS7291 Lotto:S729102

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Dati tecnici

Formula

C27H18F4N4O3S
Peso molecolare 554.52 Numero CAS 1228591-30-7
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (180.33 mM)
Ethanol 4 mg/mL (7.21 mM)
Water Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione TAK-632 è un potente inibitore pan-Raf con IC50 di 8,3 nM e 1,4 nM per B-Raf(wt) e C-Raf in saggi acellulari, rispettivamente, mostrando una minore o nessuna inibizione contro altre chinasi testate.
Target
C-Raf
(Cell-free assay)		 B-Raf
(Cell-free assay)		 Aurora B
(Cell-free assay)		 PDGFRβ
(Cell-free assay)		 FGFR3
(Cell-free assay)		 Visualizza altro
1.4 nM 8.3 nM 66 nM 120 nM 280 nM
In vitro TAK-632 inibisce la fosforilazione di MEK ed ERK nelle cellule di melanoma A375 (BRAFV600E) con IC50 di 12 nM e 16 nM, rispettivamente. Nelle cellule di melanoma umano HMVII (NRASQ61K/BRAFG469V), questo composto mostra anche una forte inibizione di pMEK e pERK con IC50 di 49 nM e 50 nM, rispettivamente. Inoltre, mostra anche attività antiproliferativa in entrambe le cellule A375 e HMVII con GI50 di 66 nM e 200 nM, rispettivamente. Questa sostanza chimica induce la dimerizzazione di RAF ma inibisce l'attività chinasica del dimero RAF a causa della sua lenta dissociazione da RAF. La combinazione di questo composto e TAK-733 mostra effetti antiproliferativi sinergici nelle cellule di melanoma mutate BRAF e NRAS.
In vivo TAK-632 mostra una biodisponibilità orale superiore sia nei ratti che nei cani. Questo composto (3,9–24,1 mg/kg, p.o.) esibisce un'efficacia antitumorale dose-dipendente senza una grave riduzione del peso corporeo in un modello di xenotrapianto di melanoma A375 (BRAFV600E) e in un xenotrapianto di melanoma umano HMVII (NRASQ61K/BRAFG469V) nei ratti. Nel modello di xenotrapianto di melanoma SK-MEL-2 mutato NRAS, questa sostanza chimica (60 o 120 mg/kg, p.o.) esibisce anche una potente efficacia antitumorale senza grave tossicità.
Caratteristiche Inibitore pan-raf biodisponibile per via orale che colpisce sia le forme selvatiche che mutanti.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:

[1]
  • Saggio del profilo chinasico

    I saggi per le chinasi serina/treonina che utilizzano ATP radiomarcato [γ-33P] vengono eseguiti in piastre a 96 pozzetti. BRAF e c-RAF sono espressi come proteina con tag FLAG N-terminale utilizzando un sistema di espressione a baculovirus. Le condizioni di reazione sono ottimizzate per ciascuna chinasi: BRAF (25 ng/pozzetto di enzima, 1 μg/pozzetto di GST-MEK1(K96R), 0,1 μCi/pozzetto di ATP [γ-32P], temperatura ambiente, 20 min di reazione); c-RAF (25 ng/pozzetto di enzima, 1 μg/pozzetto di GST-MEK1 (K96R), 0,1 μCi/pozzetto di ATP [γ-32P], temperatura ambiente, 20 min di reazione). Le reazioni enzimatiche vengono eseguite in 25 mM HEPES, pH 7,5, 10 mM acetato di magnesio, 1 mM ditiotreitolo e 0,5 μM ATP contenente una concentrazione ottimizzata di enzima, substrato e ATP radiomarcato come descritto sopra in un volume totale di 50 μL. Prima della reazione chinasica, questo composto e l'enzima vengono incubati per 5 min alla temperatura di reazione descritta sopra. Le reazioni chinasiche vengono avviate aggiungendo ATP. Dopo il periodo di reazione descritto sopra, le reazioni vengono terminate con l'aggiunta di acido tricloroacetico al 10% (concentrazione finale). Le proteine fosforilate [γ-33P] o [γ-32P] vengono filtrate in piastre filtranti GFC con un Cell Harvester e quindi le piastre vengono lavate con acido fosforico al 3%. Le piastre vengono asciugate, seguite dall'aggiunta di 40 μL di MicroScint0. La radioattività viene conteggiata da un contatore a scintillazione TopCount.
Saggio cellulare:

[1]
  • Linee cellulari

    A375 and HMVII cells

  • Concentrazioni

    ~2 μM

  • Tempo di incubazione

    72 hours

  • Metodo

    The cells are proliferated in appropriate medium (vender recommended) supplemented with 10% heat-inactivated fetal bovine serum (FBS) and antibiotics, in tissue culture dishes placed in a humidified incubator maintained at 37°C in an atmosphere of 5% CO2 and 95% air. The anti-proliferative activity of this compound is determined by treating cell lines with this compound for 3 days, followed by measurement of viable cell number in the Cell Titer-Glo assay. The cells are seeded in a 96-multiwell plate at 1500 to 4000 cells per well in medium containing FBS and cells allowed to sit down overnight. After 18–20 h, this compound at various concentrations by serial dilution are added to the cells and were cultured for 3 days in chamber. After the treatment culture, cellular proliferation is determined by a Cell Titer-Glo Luminescent Cell Viability Assay. In brief, 100 bL/well of Cell Titer-Glo Substrate solution is added to each well and the cells were cultured for an additional 10 minutes (approximately). The chemi-luminescence value is measured using a Luminescence Counter 1420 ARVO MX Light. Concentration response curves are generated by calculating the decrease in chemi-luminescence values in compound-treated samples relative to the vehicle (DMSO) treated controls.
Studio sugli animali:

[1]
  • Modelli animali

    Human melanoma A375 (BRAFV600E) xenograft model and human melanoma HMVII (NRASQ61K/BRAFG469V) xenograft model in rats.

  • Dosaggi

    ~24.1 mg/kg

  • Somministrazione

    Oral administration

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23906342/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24121489/

Convalida del prodotto da parte del cliente

Graph showing a concentration-dependent response of hypoxia-induced HIF-1α-NanoLuc activity to RAS-RAF-MEK-ERK pathway inhibitors: GDC-0994, PD-184352, selumetinib, TAK632, trametinib, and vemurafenib.

Dati da [ , , Oncotarget, 2016, 7(7):8172-83 ]

Sellecks TAK-632 È stato citato da 34 Pubblicazioni

A structure-based modelling approach identifies effective drug combinations for RAS-mutant acute myeloid leukemia [ bioRxiv, 2025, 2025.04.29.651188] PubMed: 40654850
Cell-specific models reveal conformation-specific RAF inhibitor combinations that synergistically inhibit ERK signaling in pancreatic cancer cells [ Cell Rep, 2024, 43(9):114710] PubMed: 39240715
Hypoxia drives HIF2-dependent reversible macrophage cell cycle entry [ Cell Rep, 2024, 43(7):114471] PubMed: 38996069
HDAC Inhibition Restores Response to HER2-Targeted Therapy in Breast Cancer via PHLDA1 Induction [ Int J Mol Sci, 2023, 24(7)6228] PubMed: 37047202
A Combination of Conformation-Specific RAF Inhibitors Overcome Drug Resistance Brought about by RAF Overexpression [ Biomolecules, 2023, 13(8)1212] PubMed: 37627277
BRAFΔβ3-αC in-frame deletion mutants differ in their dimerization propensity, HSP90 dependence, and druggability [ Sci Adv, 2023, 9(35):eade7486] PubMed: 37656784
Systematic analysis of the MAPK signaling network reveals MAP3K-driven control of cell fate [ Cell Syst, 2022, 13(11):885-894.e4] PubMed: 36356576
Strategies to inhibit FGFR4 V550L-driven rhabdomyosarcoma [ Br J Cancer, 2022, 10.1038/s41416-022-01973-6] PubMed: 36097178
A Systems Biology Approach to Investigate Kinase Signal Transduction Networks That Are Involved in Triple Negative Breast Cancer Resistance to Cisplatin [ J Pers Med, 2022, 12-81277] PubMed: 36013226
Proteasomal down-regulation of the proapoptotic MST2 pathway contributes to BRAF inhibitor resistance in melanoma [ Life Sci Alliance, 2022, 5(10)e202201445] PubMed: 36038253

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