T0070907

T0070907 è un potente e selettivo antagonista di PPARγ. Con un'affinità di legame apparente di 1 nM, questo composto modifica covalentemente PPARγ sulla cisteina 313 nell'elica 3 del PPARγ2 umano. Blocca la funzione di PPARγ sia negli saggi basati su geni reporter cellulari che negli saggi di differenziazione degli adipociti. Coerentemente con il suo ruolo di antagonista di PPARγ, questa sostanza chimica blocca il reclutamento indotto da agonisti di peptidi derivati da coattivatori a PPARγ in un saggio basato sulla fluorescenza omogenea risolta nel tempo e promuove il reclutamento del corepressore trascrizionale NCoR a PPARγ sia negli saggi di pull-down di glutatione S-transferasi che in un saggio di gel shift dipendente da PPARγ/recettore X dei retinoidi (RXR) α. Studi con recettori mutanti suggeriscono che modula l'interazione di PPARγ con queste proteine cofattore influenzando la conformazione dell'elica 12 del dominio di legame del ligando di PPARγ. È interessante notare che, mentre il reclutamento di NCoR indotto da T0070907 all'eterodimero PPARγ/RXRα può essere quasi completamente invertito dal trattamento simultaneo con l'agonista di RXRα LGD1069, il trattamento con questo composto ha solo effetti modesti sul reclutamento di coattivatori indotto da LGD1069 all'eterodimero PPARγ/RXRα. [1] Questo trattamento chimico inibisce la proliferazione, l'invasione e la migrazione ma non influisce significativamente sull'apoptosi. L'inibizione molecolare utilizzando un recettore dominante negativo (Δ462) produce risultati simili. Media anche una diminuzione dose-dipendente della fosforilazione di PPARγ e della sua capacità di legarsi al DNA, e può influenzare direttamente la segnalazione della proteina chinasi attivata da mitogeni. [2]

Il precondizionamento con lipopolisaccaride attenua significativamente lo sviluppo di disfunzione renale, lesioni epatocellulari e insufficienza circolatoria, nonché l'aumento dei livelli plasmatici di interleuchina-1 [beta] causato da grave endotossiemia. Questo composto può attenuare tutti questi effetti benefici offerti dal precondizionamento con lipopolisaccaride [3]

• Saggio di legame del ligando

  Per determinare l'affinità di legame di T0070907 ai PPAR, viene eseguito un saggio di prossimità a scintillazione (SPA) con le seguenti modifiche. Una reazione di 90 μl contiene tampone SPA (10 mM KH₂PO₄, 10 mM KH₂PO₄, 2 mM EDTA, 50 mM NaCl, 1 mM ditiotreitolo, 2 mM CHAPS, 10% (v/v) glicerolo, pH 7.1), 50 ng di GST-PPARγ (o 150 ng di GST-PPARα, GST-PPARδ), 5 nM di radioligandi marcati con ³H e 5 μl di questo composto in Me₂SO. Dopo incubazione per 1 ora a temperatura ambiente, vengono aggiunti 10 μl di microsfere SPA rivestite di polilisina (a 20 mg/ml in tampone SPA) e la miscela viene incubata per 1 ora prima della lettura in Packard Topcount.

• Linee cellulari

  MCF-7 cells

• Concentrazioni

  20 μM and higher concentrations

• Tempo di incubazione

  48 h

• Metodo

  MTS assay

• Modelli animali

  Preconditioning is performed by administering a low dose (1 mg/kg) of Escherichia coli LPS (serotype 0.127:B8) intraperitoneally 24 hr before the induction of severe endotoxemia.

• Dosaggi

  1 mg/kg

• Somministrazione

  intraperitoneally