Stattic

Stattic inibisce il legame di un peptide contenente fosfotirosina derivato dal recettore gp130 al dominio SH2 di STAT3 in modo fortemente dipendente dalla temperatura. Questo composto ha solo un effetto molto debole sul legame di un peptide tirosina-fosforilato al dominio SH2 della tirosina chinasi Lck. E non inibisce la dimerizzazione di altri due fattori di trascrizione dimerici (c-Myc/Max e Jun/Jun). Inibisce anche i fosfopeptidi marcati con fluoresceina ai domini SH2 di STAT1 e STAT5b. Questa sostanza chimica inibisce selettivamente il legame del DNA degli omodimeri STAT3 a una concentrazione di 10 μM. È stato dimostrato che inibisce la fosforilazione cellulare di STAT3 a Tyr705 con scarso effetto sulla fosforilazione di STAT1 a Tyr701 (nelle cellule HepG2) o sulla fosforilazione di JAK1, JAK2 e c-Src (nelle cellule MDA-MB-231 e MDA-MB-235S). Questo composto aumenta il tasso apoptotico delle linee cellulari di cancro al seno dipendenti da STAT3. [1]

• Screening ad alto rendimento e saggi di polarizzazione della fluorescenza

  Lo screening viene eseguito a circa 30 °C. La specificità dei risultati dello screening viene convalidata in saggi analoghi per il legame dei composti di prova ai domini SH2 di STAT1, STAT5 e Lck. La concentrazione finale dei componenti del tampone utilizzati per tutti i saggi FP è 10 mM HEPES (pH 7,5), 1 mM EDTA, 0,1% Nonidet P-40, 50 mM NaCl e 10% DMSO. L'assenza di ditiotreitolo è essenziale per l'attività inibitoria. Le sequenze dei peptidi sono: STAT3, 5-carbossifluoresceina-GY(PO₃H₂)LPQTV-NH₂; STAT1, 5-carbossifluoresceina-GY(PO₃H₂)DKPHVL; STAT5, 5-carbossifluoresceina-GY(PO₃H₂)LVLDKW; e Lck, 5-carbossifluoresceina-GY(PO₃H₂)EEIP. Per l'analisi di specificità a 30 °C, le proteine vengono utilizzate a 150 nM (STAT1, STAT3 e STAT5). Per l'analisi di specificità a 37 °C, le proteine vengono utilizzate a 370 nM (STAT3) o 100 nM (Lck). Le proteine vengono incubate con i composti di prova in provette Eppendorf alle temperature indicate per 60 minuti prima dell'aggiunta dei rispettivi peptidi marcati con 5-carbossifluoresceina (concentrazione finale: 10 nM). Prima della misurazione a temperatura ambiente, le miscele vengono lasciate equilibrare per almeno 30 minuti. I composti di prova vengono utilizzati alle concentrazioni indicate diluite da una soluzione madre 20× in DMSO. Le curve di legame e le curve di inibizione vengono adattate con SigmaPlot. Tutte le curve di competizione vengono ripetute tre volte in esperimenti indipendenti.

• Linee cellulari

  Ly3 cells

• Concentrazioni

  ~2.5 μM

• Tempo di incubazione

  48 h

• Metodo

  MTS

• Modelli animali

  Ly3 parental NOD/SCID IL2R null xenograft

• Dosaggi

  3.75 mg/kg every day

• Somministrazione

  intra tumor