SP-96

N. catalogoS9658 Lotto:S965801

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Dati tecnici

Formula

C₂₅H₂₀FN₇O

Peso molecolare

453.47

Numero CAS

2682114-54-9

Solubilità (25°C)*

In vitro

DMSO

91 mg/mL (200.67 mM)

Ethanol

2 mg/mL (4.41 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)

Homogeneous suspension

CMC-NA

≥5mg/ml

Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione

SP-96 è un inibitore potente, selettivo e non competitivo dell'ATP della Aurora B con IC50 di 0,316 nM. Questo composto può essere utilizzato per la ricerca sul carcinoma mammario triplo negativo (TNBC).

Target

Aurora B
(Cell-free assay)

0.316 nM

In vitro

SP-96 mostra una potenza sub-nanomolare negli saggi enzimatici di Aurora B (IC50 = 0,316 ± 0,031 nM). Questo composto mostra una selettività >2000 volte superiore contro FLT3 e KIT, il che è importante per la normale ematopoiesi. La cinetica enzimatica di questo inibitore mostra un'inibizione non competitiva dell'ATP che lo rende un inibitore first-in-class. Mostra un'inibizione selettiva della crescita nello screening NCI60, inclusa l'inibizione di MDA-MD-468, una linea cellulare di carcinoma mammario triplo negativo.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:^{^[1]}	Saggio enzimatico di Aurora Kinase B Il saggio di inibizione della chinasi viene eseguito misurando l'attività chinasica in un saggio di microfluidica. Viene monitorata la separazione di un prodotto fosforilato dal substrato. Il saggio viene eseguito utilizzando un chip a 12 siringhe su un Caliper EZ Reader II. La ricetta utilizzata per il tampone di separazione è 100 mM HEPES, 10 mM EDTA, 0,015% Brij-35, 0,1% CR-3. Le soluzioni stock del composto (20 mM in DMSO) vengono diluite in tampone chinasi. 1 μL della soluzione stock desiderata viene trasferito in una piastra di microtitolazione a 384 pozzetti. L'enzima Aurora B viene diluito in tampone chinasi a una concentrazione di 2 nM. 5 μL della miscela enzimatica vengono trasferiti nella piastra del saggio. Gli inibitori/enzima Aurora B vengono incubati per 60 minuti con lieve agitazione. Viene preparata una miscela di substrato contenente ATP e peptide marcato con 5FAM disciolto nel tampone chinasi descritto sopra. 5 μL della soluzione di substrato vengono aggiunti alla piastra del saggio. Le concentrazioni di esecuzione sono le seguenti: peptide (1,5 μM), ATP (190 μM) e questo composto diluizioni di 12 punti ½ log (0,2 mM-0,632 nM). Nessun inibitore viene aggiunto per il controllo positivo e nessun enzima viene aggiunto per il controllo negativo. Per il controllo di esecuzione, viene utilizzato barasertib. La percentuale di inibizione viene misurata confrontando il peptide di partenza con i picchi del prodotto fosforilato.
Saggio cellulare:^{^[1]}	Linee cellulari MCF-7 cells Concentrazioni -- Tempo di incubazione 24 h Metodo The growth inhibition of 60 cell lines is obtained by submitting the compound to National Cancer Institute’s NCI60 panel. MCF-7 cells are cultured in RPMI-1640 medium with 5% FBS in an incubator maintained at 37 ℃ and 5% CO2. The media is changed on alternate days. After reaching confluency, the media is aspirated, cells are washed with PBS, detached using 0.25% trypsin and centrifuged. The collected cells are seeded in 96-well microtiter plates at a density of 5000 cells/well. The cells are allowed to adhere to plate overnight. The test compounds, vehicle control and positive controls are added 24 h after the cells are plated and allowed to incubate. Following 24 h of incubation, the media is aspirated, and the cells are washed with PBS. 40 mL of the media and 10 mL of 5 mg/mL of MTT solution prepared in PBS is added to the cells and incubated for 4 h at 37 ℃ and 5% CO2. After incubation, 150 mL of DMSO is added to each well and the cell viability is measured at 570 nM by an ELISA plate reader.

Saggio della chinasi:^{^[1]}

Saggio enzimatico di Aurora Kinase B
Il saggio di inibizione della chinasi viene eseguito misurando l'attività chinasica in un saggio di microfluidica. Viene monitorata la separazione di un prodotto fosforilato dal substrato. Il saggio viene eseguito utilizzando un chip a 12 siringhe su un Caliper EZ Reader II. La ricetta utilizzata per il tampone di separazione è 100 mM HEPES, 10 mM EDTA, 0,015% Brij-35, 0,1% CR-3. Le soluzioni stock del composto (20 mM in DMSO) vengono diluite in tampone chinasi. 1 μL della soluzione stock desiderata viene trasferito in una piastra di microtitolazione a 384 pozzetti. L'enzima Aurora B viene diluito in tampone chinasi a una concentrazione di 2 nM. 5 μL della miscela enzimatica vengono trasferiti nella piastra del saggio. Gli inibitori/enzima Aurora B vengono incubati per 60 minuti con lieve agitazione. Viene preparata una miscela di substrato contenente ATP e peptide marcato con 5FAM disciolto nel tampone chinasi descritto sopra. 5 μL della soluzione di substrato vengono aggiunti alla piastra del saggio. Le concentrazioni di esecuzione sono le seguenti: peptide (1,5 μM), ATP (190 μM) e questo composto diluizioni di 12 punti ½ log (0,2 mM-0,632 nM). Nessun inibitore viene aggiunto per il controllo positivo e nessun enzima viene aggiunto per il controllo negativo. Per il controllo di esecuzione, viene utilizzato barasertib. La percentuale di inibizione viene misurata confrontando il peptide di partenza con i picchi del prodotto fosforilato.

Saggio cellulare:^{^[1]}

Linee cellulari
MCF-7 cells
Concentrazioni
--
Tempo di incubazione
24 h
Metodo
The growth inhibition of 60 cell lines is obtained by submitting the compound to National Cancer Institute’s NCI60 panel. MCF-7 cells are cultured in RPMI-1640 medium with 5% FBS in an incubator maintained at 37 ℃ and 5% CO2. The media is changed on alternate days. After reaching confluency, the media is aspirated, cells are washed with PBS, detached using 0.25% trypsin and centrifuged. The collected cells are seeded in 96-well microtiter plates at a density of 5000 cells/well. The cells are allowed to adhere to plate overnight. The test compounds, vehicle control and positive controls are added 24 h after the cells are plated and allowed to incubate. Following 24 h of incubation, the media is aspirated, and the cells are washed with PBS. 40 mL of the media and 10 mL of 5 mg/mL of MTT solution prepared in PBS is added to the cells and incubated for 4 h at 37 ℃ and 5% CO2. After incubation, 150 mL of DMSO is added to each well and the cell viability is measured at 570 nM by an ELISA plate reader.

Riferimenti

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32717530/

Sellecks SP-96 È stato citato da 1 Pubblicazione

DELs enable the development of BRET probes for target engagement studies in cells [ Cell Chem Biol, 2023, 30(8):987-998.e24]	PubMed: 37490918

DELs enable the development of BRET probes for target engagement studies in cells [ Cell Chem Biol, 2023, 30(8):987-998.e24]

PubMed: 37490918

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