SNX-2112

Il trattamento delle cellule BT-474 con 1 μM di SNX-2112 provoca una down-regulation dell'espressione di HER2 entro 3-6 ore dall'esposizione al farmaco, con una perdita quasi completa dell'espressione di HER2 entro 10 ore. Il trattamento con questo composto provoca anche un declino dell'espressione totale di Akt. Inibisce la proliferazione cellulare con valori IC50 che vanno da 10 a 50 nM, nelle cellule tumorali BT474, SKBR-3, SKOV-3, MDA-468, MCF-7 e H1650. E questi effetti antiproliferativi sono associati all'ipofosforilazione di Rb, all'arresto di G1 e a modesti livelli di apoptosi. [1] Questa sostanza chimica si lega competitivamente al sito di legame dell'adenosina trifosfato N-terminale di Hsp90. Induce l'apoptosi tramite la scissione delle caspasi-8, -9, -3 e della poli (ADPribosio) polimerasi. Il composto inibisce l'attivazione di Akt indotta da citochine e della chinasi correlata al segnale extracellulare (ERK) e supera anche i vantaggi di crescita conferiti da interleuchina-6, fattore di crescita insulino-simile-1 e cellule stromali del midollo osseo. Inibisce la formazione di tubi da parte delle cellule endoteliali della vena ombelicale umana tramite l'abrogazione della via eNOS/Akt e inibisce marcatamente la formazione di osteoclasti tramite la down-regulation di ERK/c-fos e PU.1. [2] Le linee cellulari (otto linee cellulari da osteosarcoma, neuroblastoma, epatoblastoma e linfoma) studiate dimostrano sensibilità a questo agente con valori IC50 che vanno da 10-100 nM. Una dose più alta (70 nM) mostra un'inibizione più prolungata e un maggiore accumulo sub-G1. I livelli osservati di Akt1 e C-Raf sono marcatamente ridotti nel tempo insieme ad un aumento della scissione di PARP. [3] Una ricerca recente indica che questo composto induce autofagia in modo tempo- e dose-dipendente tramite l'inibizione di Akt/mTOR/p70S6K. Induce apoptosi e autofagia significative nelle cellule di melanoma umano A-375, e può essere un efficace agente terapeutico mirato. [4]

SNX-2112 è un metabolita attivo dei composti SNX-5542, che inibisce la crescita delle cellule di mieloma multiplo (MM) e prolunga la sopravvivenza in un modello murino di xenotrapianto, e il blocco di HSP90 da parte di questo composto non solo inibisce la crescita delle cellule MM ma agisce anche nel microambiente del midollo osseo per bloccare l'angiogenesi e l'osteoclastogenesi. [2]

• Saggio di Spostamento dell'ATP

  Per il saggio di spostamento per affinità proteica, una resina di affinità a base di purine viene generata incubando Sepharose legata all'ATP con lisato di cellule Jurkat (congelate rapidamente e omogeneizzate in soluzione fisiologica) a 4 °C. Questa viene quindi incubata con SNX-2112 per 90 minuti. Le proteine eluite da questo composto vengono quindi risolte mediante SDS-PAGE, visualizzate con colorazione all'argento ed escisse dal gel per l'identificazione basata sulla spettrometria di massa. Brevemente, dopo la decolorazione e la digestione con tripsina, i peptidi vengono estratti con μC18 ZipTips e quindi eluiti e depositati direttamente su un bersaglio convenzionale in acciaio inossidabile per desorbimento/ionizzazione laser assistita da matrice (MALDI) con una soluzione satura di acido α-ciano-4-idrossicinnamico in 50% acetonitrile, 0,15% acido formico. Gli spettri di massa vengono quindi acquisiti utilizzando un analizzatore di proteomica MALDI-TOF/TOF 4700. Vengono acquisiti spettri MS (1.000 scatti per spettro), e i tre picchi da ciascuno con il maggiore rapporto segnale/rumore vengono automaticamente inviati per l'analisi MS in tandem (3000 scatti per spettro). L'energia di collisione è di 1 keV. L'aria viene utilizzata come gas di collisione. L'identificazione delle proteine viene effettuata dai dati MS e MS in tandem utilizzando il software GPS Explorer con il motore di ricerca integrato del database Mascot.

• Linee cellulari

  BT474, SKBR-3, SKOV-3, MDA-468, MCF-7 and H1650 cancer cells

• Concentrazioni

  0-500 nM

• Tempo di incubazione

  24 hours

• Metodo

  Cell viability is determined by seeding 2-5 × 10³ cells per well in 96- well plates and treating with SNX-2112 24 hours after plating in complete medium (200 μL). Each drug concentration is tested in eight wells. Cells are assayed using the Alamar blue viability test after a 96-h incubation. Flow cytometry is done using nuclei stained with ethidium bromide and isolated via the Nusse protocol

• Modelli animali

  5 × 10⁶ MM.1S cells are inoculated subcutaneously in the Fox Chase SCID mice (6-7 weeks old).

• Dosaggi

  20 or 40 mg/kg

• Somministrazione

  SNX-5422 is administered orally 3 times per week, total 3 weeks.