SNS-314

Nella linea cellulare di carcinoma colorettale HCT116, con livelli di proteina p53 intatti o esauriti, il mesilato di SNS-314 mostra una maggiore efficacia se somministrato sequenzialmente con altri agenti chemioterapici standard e le sinergie più profonde sono identificate per gli agenti che attivano il checkpoint dell'assemblaggio del fuso. [2] Uno studio recente mostra che questo composto mostra una potente attività antiproliferativa nelle cellule HCT116 e inibisce la formazione di colonie in agar molle. [3]

Il trattamento sequenziale con SNS-314 Mesilato 24 ore dopo produce una significativa inibizione del 72,5% della crescita tumorale degli xenotrapianti HCT116, mentre questo composto come singolo agente non produce alcuna inibizione significativa della crescita tumorale HCT116. [2] Nel modello di xenotrapianto di cancro del colon umano HCT116, la somministrazione di 50 e 100 mg/kg di questa sostanza chimica determina un'inibizione dose-dipendente della fosforilazione dell'istone H3, indicando un'efficace inibizione di Aurora-B in vivo. Inoltre, i tumori HCT116 di animali trattati con questo agente mostrano risposte potenti e sostenute, inclusa la riduzione dei livelli di istone H3 fosforilato, l'aumento della caspasi-3 e la comparsa di un aumento delle dimensioni nucleari. [3]

• Saggio Aurora-A Kinase

  Aurora A di topo umanizzata (amminoacidi 107-403) è espressa in E. coli come descritto in precedenza. Per i saggi IC50, questo composto viene titolato tre volte in DMSO e diluito 12,5 volte nel tampone di saggio (10 mM Tris HCl pH 7,2, 10 mM MgCl₂, 0,05% NaN₃, 0,01% Tween-20 e 0,1% BSA). Questa sostanza chimica viene quindi diluita 4 volte nel tampone di saggio contenente Aurora A e FAM-PKAtide a concentrazioni finali rispettivamente di 2 nM e 50 nM. La reazione chinasica viene avviata aggiungendo ATP nel tampone di saggio a una concentrazione finale di 10 mM e incubata a 21 °C per 25 minuti. Come controllo positivo, il DMSO viene aggiunto al posto di questo composto e come controllo negativo il tampone di saggio viene aggiunto al posto di Aurora A. Entrambe le reazioni di controllo sono condotte in triplicato. Per rilevare il PKAtide fosforilato, la reazione chinasica viene combinata con la Progressive Binding Solution (1:400 Progressive Binding Reagent, 1 × Buffer A, Molecular Devices) in un rapporto di 1:3. La miscela viene incubata per 30 minuti a 21 °C e la piastra viene scansionata su un Analyst AD con eccitazione a 485 nm ed emissione a 530 nm. La percentuale di attività enzimatica relativa viene calcolata normalizzando il valore di mP per ciascun pozzetto alla media del controllo positivo. I valori di attività enzimatica relativa vengono tracciati in funzione del logaritmo della concentrazione del composto e i valori di IC50 vengono generati nel software GraphPad Prism utilizzando una curva dose-risposta sigmoide. IC50

• Linee cellulari

  HCT116 SCR and HCT116 p53 RNAi cells

• Concentrazioni

  ~125 nM

• Tempo di incubazione

  48 hours

• Metodo

  Viability is measured using the CellTiter-Blue cell viability assay. Cells are treated as described above, although with a 5-day incubation period. Cytotoxicity is determined by measuring intracellular ATP using the CellTiter-Glo Luminescence Cell Viability Assay. Cells are seeded in white 96-well tissue culture plates at a density of 1.5-2 × 10³ cells/well, and a serial dilution of SNS-314 is dosed in combination with fixed concentrations for a total of 72 hours. Viability is determined as the ratio between the ATP in treated cells versus control cells. Apoptosis is measured using the caspase-Glo 3/7 system. Cells are plated in white 96-well plates as described above and treated first with this compound for 24 hours, washed with 200 μL of 1× PBS, and fresh medium is added with the second agent for 24 hours.

• Modelli animali

  HCT116 cells are injected s.c. into the right flank of nu/nu mice.

• Dosaggi

  ≤42.5 mg/kg

• Somministrazione

  Administered via i.p.