SN-38

SN-38, un metabolita biologicamente attivo di CPT-11. Questo composto causa la più forte inibizione della DNA topoisomerase I, seguita da CPT e poi CPT-11. CPT-11 sposta la posizione del DNA rilassato in modo dose-dipendente nella direzione del DNA intaccato, ma questo composto e CPT non mostrano alcun effetto sulla posizione del DNA rilassato. Inibisce la sintesi del DNA in modo dose-dipendente e tempo-dipendente. I rispettivi valori di IC50 di questa sostanza chimica, nella sintesi del DNA, sono 0,077 μM. L'effetto inibitorio sulla sintesi dell'RNA è inferiore a quello sulla sintesi del DNA e non inibisce la sintesi proteica. Questo metabolita ha causato frequenti rotture a singolo filamento del DNA nelle cellule P388. [1]

Dopo somministrazione orale, le concentrazioni massime di questo composto si verificano entro 1 ora, e la percentuale di lattone non legato nel plasma murino a 1000 ng/mL è del 3,4 +/- 0,67%, mentre a 100 ng/mL la percentuale non legata è dell'1,18 +/- 0,14%. Le AUC del lattone in topi portatori di xenotrapianti di neuroblastoma umano sono maggiori rispetto agli animali non portatori di tumore. [2]

• Saggio di Topoisomerase I

  Un'unità (la quantità minima per il completo rilassamento di 0,5 μg di DNA SV40 nelle condizioni di questo studio) di Topoisomerase I, 0,5 μL dei composti in esame e 0,5 μg di DNA SV40 vengono aggiunti in sequenza al tampone di reazione, che è composto da 25 mM Tris-HCl (pH 7,5), 50 mM KCl, 5 mM MgCl₂, 0,25 mM sale disodico di EDTA, 0,25 mM ditiotreitolo, 15 μg/mL di albumina di siero bovino e 5% di glicerolo. Quindi, la miscela di reazione (50 μL) viene incubata per 10 min a 37 °C, e la reazione viene terminata mediante trattamento con 7,5 μL di una soluzione composta da 1% di sodio dodecil solfato, 20 mM di sale disodico di EDTA e 0,5 mg/mL di proteinasi K per ulteriori 30 min a 37 °C. I campioni vengono miscelati con 5 μL del tampone di caricamento contenente 10 mM di Na₂HPO₄, 31,3% di saccarosio e 0,3% di blu di bromofenolo. Il DNA rilassato (forma Ir) viene separato dal DNA superavvolto (forma I) e intaccato (forma II) mediante elettroforesi su gel di agarosio all'0,8% a 50 mA e 20 V per 17 h in presenza di 2 μg/mL di CHQ, 10 mM di EDTA, 30 mM di NaH₂PO₄ e 36 mM di Tris-HCl (pH 7,8). Dopo l'elettroforesi, il gel viene colorato con 0,05% di bromuro di etidio e fotografato con luce UV (302 nm). La quantità di DNA viene quantificata utilizzando un densitometro.

• Linee cellulari

  A-172, U-87, and LA-567

• Concentrazioni

  0 -1000 nM

• Tempo di incubazione

  48 h

• Metodo

  MTT assay

• Modelli animali

  Male Sprague-Dawley rats

• Dosaggi

  10 mg/kg

• Somministrazione

  i.v.