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Descrizione biologica
| Specificità | SLC22A2/OCT2 Antibody [D23A15] rileva i livelli endogeni della proteina totale SLC22A2/OCT2. |
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| Contesto | SLC22A2, noto anche come Organic Cation Transporter 2 (OCT2), è un trasportatore facilitato polispecifico (~63 kDa) della famiglia SLC22. Predominantemente espresso sulla membrana basolaterale delle cellule del tubulo prossimale renale, OCT2 presenta 12 domini transmembrana che formano una cavità di legame per il substrato rivolta verso l'interno. Possiede un'ampia ansa extracellulare 2 contenente siti di glicosilazione per la stabilità conformazionale, e residui chiave come Asp449 e Trp222 sono critici per il riconoscimento dei cationi e la gestione degli stati di protonazione durante il trasporto. OCT2 opera attraverso un meccanismo di accesso alternato, utilizzando il gradiente elettrochimico (tipicamente da -50 a -70 mV) senza richiedere ATP o accoppiamento a Na⁺. Questo trasportatore sposta cationi organici, inclusi metformina, cisplatino, istamina, dopamina e creatinina, bidirezionalmente, con un ruolo predominante nell'assorbimento basolaterale nelle cellule tubulari per la secrezione vettoriale. OCT2 mostra una leggera preferenza per cationi monovalenti più piccoli (Km 10–500 μM) e si basa su aperture transitorie dei pori innescate dall'occlusione del substrato, che ribalta l'accessibilità del substrato. Le interazioni elettrostatiche con le ammine caricate positivamente consentono la selettività dei cationi, mentre gli anioni vengono esclusi. Questa attività è cruciale per la clearance di tossine sistemiche, neurotrasmettitori e per la disposizione di xenobiotici nel fegato, nei neuroni e nella placenta. Le varianti comuni di OCT2 (ad esempio, R270S, A270S) riducono la capacità di trasporto dal 20 al 50% per alcuni substrati, aumentando il rischio di nefrotossicità con chemioterapici a base di platino e riducendo l'efficacia della metformina nel diabete. |
Informazioni sullutilizzo
| Applicazione | IHC, FCM | Diluizione |
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| Reattività | Human | ||||||
| Fonte | Mouse Monoclonal Antibody | MW | |||||
| Tampone di conservazione | PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 | Conservazione (Dalla data di ricevimento) |
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years | ||||
| IHC |
Experimental Protocol：
Deparaffinization/Rehydration
1. Deparaffinize/hydrate sections:
2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.
3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.
4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.
5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.
6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.
Staining
1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.
2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.
3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.
4. Wash sections in wash buffer for 5 min.
5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.
6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.
7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.
8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.
9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.
10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.
11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.
12. Immerse slides in dH2O.
13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.
14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.
15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.
16. Mount sections with coverslips and mounting medium.
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Riferimenti
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