MK-8776 (SCH 900776)

MK-8776 (SCH 900776) is a less potent inhibitor of Chk2 and CDK2 with IC50 of 1.5 μM and 0.16 μM, respectively. It shows no significant inhibition of cytochrome P450 human liver microsomal isoforms 1A2, 2C9, 2C19, 2D6, and 3A4. In combination with an antimetabolite, this compound induces accumulation of γ-H2AX within 2 hours, indicative of replication fork collapse and double stranded DNA breaks. Additionally, it suppresses accumulation of the Chk1 pS296 autophosphorylation in a dose-dependent manner. Exposure of proliferating WS1 cells to SCH 900776 is associated with rapid, dose-dependent accumulation of Chk1 pS345, indicating that cycling populations of normal cells induce Chk1 pS345 following exposure to it as part of a futile cycle, perhaps driven by AT-family kinases and DNA-PK.[1]

Dose escalation of MK-8776 (SCH 900776) (16 mg/kg and 32 mg/kg) induces incremental improvements in tumor response. Importantly, doses of this compound associate with robust biomarker activation and improved tumor response are not associated with enhanced toxicity on hematological parameters in BALB/c mice. [1]

• Saggio Chk1 SPA

  Un saggio in vitro che utilizza His-Chk1 ricombinante espressa nel sistema di espressione del baculovirus come fonte enzimatica e peptide biotinilato basato su CDC25C come substrato. His-Chk1 viene diluito a 32 nM in tampone chinasi contenente 50 mM Tris pH 8,0, 10 mM MgCl₂ e 1 mM DTT. Il peptide CDC25C (peptide biotinilato CDC25 Ser216 C-terminale) viene diluito a 1,93 μM in tampone chinasi. Per ogni reazione chinasi, 20 μL di soluzione enzimatica Chk1 a 32 nM e 20 μL di CDC25C a 1,926 μM vengono miscelati e combinati con 10 μL di MK-8776 (SCH 900776) diluito in 10% DMSO, ottenendo concentrazioni finali di reazione di 6,2 nM Chk1, 385 nM CDC25C e 1% DMSO dopo l'aggiunta della soluzione di avvio. La reazione viene avviata mediante l'aggiunta di 50 μL di soluzione di avvio composta da 2 μM ATP e 0,2 μCi di ³³P-ATP, ottenendo una concentrazione finale di reazione di 1 μM ATP, con 0,2 μCi di ³³P-ATP per reazione. Le reazioni chinasi vengono eseguite per 2 ore a temperatura ambiente e vengono arrestate mediante l'aggiunta di 100 μL di soluzione di arresto composta da 2 M NaCl, 1% H₃PO₄ e 5 mg/mL di perline SPA rivestite di streptavidina. Le perline SPA vengono catturate utilizzando una piastra filtrante GF/B a 96 pozzetti e un raccoglitore universale Filtermate. Le perline vengono lavate due volte con 2 M NaCl e due volte con 2 M NaCl con 1% di acido fosforico. Il segnale viene quindi analizzato utilizzando un contatore a scintillazione liquida TopCount a 96 pozzetti. Le curve dose-risposta vengono generate da diluizioni seriali doppie a 8 punti di questo composto. I valori di IC50 vengono derivati mediante analisi di regressione non lineare.

• Linee cellulari

  mESCs

• Concentrazioni

  10 μM

• Tempo di incubazione

  1 h

• Metodo

  Cells were treated with MK-8776 (SCH 900776), other inhibitors, or vehicle for 1 hour.

• Modelli animali

  Female nude mice injected subcutaneously with A2780 or MiaPaCa2 cells

• Dosaggi

  ~50 mg/kg

• Somministrazione

  Administered intraperitoneally