SC79

SC79 sopprime la traslocazione della membrana plasmatica di PH_AKTM-GFP e migliora la fosforilazione di tutte e tre le isoforme di Akt nelle cellule HEK293, HeLa, HL60, NB4 e HsSulton (cellule B). Questo composto riduce l'eccitotossicità neuronale e previene la morte neuronale indotta da ictus. [1] Ripristina la proliferazione delle cellule con knockdown di BRAT1 e riduce la produzione di superossido nei mitocondri delle cellule positive al MitoSox. [2]

Nel modello murino di ischemia cerebrale focale permanente, SC79 (0,04 mg/g, i.p.) consente l'attivazione citosolica di Akt e ricapitola la funzione cellulare primaria della segnalazione di Akt, con conseguente aumento della sopravvivenza neuronale. [1]

• Fosforilazione citosolica di Akt

  Le cellule Hela vengono private di siero per 1 ora e trattate con IGF (100ng/mL) o SC79 (4 μg/mL) per 30 minuti. Le cellule vengono lisate in tampone di lisi contenente 250 mM di saccarosio, 20 mM di HEPES, 10 mM di KCl, 1,5 mM di MgCl₂, 1 mM di EDTA, 1 mM di EGTA integrato con inibitori delle proteasi. Le cellule vengono passate attraverso un ago 25G più volte e tenute in ghiaccio per 20 minuti. A questo punto viene prelevato il lisato cellulare totale. I lisati cellulari vengono centrifugati a 100.000 g per 30 minuti. Il surnatante viene raccolto come frazione citosolica. Il pellet viene lavato con tampone di lisi e rappresenta la frazione di membrana. Il lisato cellulare totale, le frazioni citosolica e di membrana vengono risolti mediante SDS-PAGE e analizzati per fosfo-Akt (S473), Akt totale, Tubulina (marcatore citosolico) e Orai1 (marcatore di membrana) mediante western blotting.

• Linee cellulari

  HsSultan and NB4 cells

• Concentrazioni

  8 μg/mL

• Tempo di incubazione

  24 h

• Metodo

  HsSultan or NB4 cells (2.5 × 10⁵) are plated in a 24-well plate in 500 μL of phenol red-free RPMI medium supplemented with 10% FBS. After incubation for 24 hours, each compound (8 µg/mL) is added and cultured for overnight (16–20 h). Fifty microliters of MTT solution (5 mg/mL in PBS) are added to each well. Following 2 hrs incubation, the purple formazan crystals are dissolved by directly adding in 500 μL of isopropanol with 0.1 M HCl to each well. After clearing the cell debris by centrifugation, the absorbance is measured at a wavelength of 570 nm.

• Modelli animali

  Permanent focal cerebral ischemia mouse model

• Dosaggi

  0.04 mg/g

• Somministrazione

  i.p.