In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO
40%PEG300
5%Tween80
50%ddH2O
Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.
4mg/ml
(8.34mM)
Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 80 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution
5% DMSO
95% Corn oil
Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.
2mg/ml
(4.17mM)
Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 40 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile. * Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto. * Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)
Preparazione delle soluzioni stock
Attività biologica
Descrizione
SBE 13 HCl è un inibitore potente e selettivo di PLK1 con un'IC50 di 200 pM, con una selettività >4000 volte superiore rispetto alla chinasi Aurora A, Plk2 e Plk3.
Target
PLK1
200 pM
In vitro
SBE 13 diminuisce la proliferazione cellulare in varie linee cellulari tumorali e causa un arresto in G2/M seguito da apoptosi. Nelle cellule primarie, SBE 13 non compromette il Cell Cycle e quindi la proliferazione delle cellule primarie. SBE13 in combinazione con Enzastaurin mostra una riduzione sinergica della proliferazione cellulare e un'aumentata induzione dell'apoptosi nelle cellule HCT116(p53-/-).
Per saggiare l'attività chinasica di Plk1 e Aurora A, le cellule vengono lisate dopo 13 ore di rilascio in presenza di SBE13 dopo doppio blocco con timidina, e le chinasi vengono immunoprecipitate dai lisati usando anticorpi come descritto. In breve, per ogni immunoprecipitazione, 800 µg di proteine totali sono stati incubati con 1,5 µg di cocktail di anticorpi Plk1, 3 µg di anticorpi Plk2, 3 µg di anticorpi Plk3 o 5 µg di anticorpi Aurora A, rispettivamente, per 2 ore a 4°C su un rotatore. La proteina immunoprecipitata viene raccolta utilizzando perle di agarosio Proteina G. Gli immunoprecipitati di Plk1, Plk2 e Plk3 vengono incubati con 1 µg di caseina e con 1 µCi di [γ32-P]ATP per 30 min a 37°C in tampone di chinasi. Gli immunoprecipitati di Aurora A vengono incubati con 0,5 µl di Istone e con 1 µCi di [γ32-P]ATP per 60 min a temperatura ambiente in tampone di chinasi. I prodotti dei saggi chinasici vengono frazionati su gel di poliacrilammide Bis-Tris al 10%, e il substrato fosforilato viene visualizzato mediante autoradiografia dopo un'esposizione di 12-36 ore. Una quantità uguale di immunoprecipitati viene sottoposta ad analisi Western blot per confermare il carico uguale di proteine Plk1, Plk2, Plk3 o Aurora A nelle reazioni chinasiche. La Plk1 immunoprecipitata dopo 13 ore di rilascio in presenza di SBE13 viene saggiata dopo defosforilazione utilizzando la proteina fosfatasi λ e confrontata con l'attività chinasica della Plk1 endogena immunoprecipitata. L'attività della chinasi Plk1 con e senza defosforilazione viene confrontata e viene calcolato il rapporto tra l'attività chinasica della Plk1 endogena immunoprecipitata defosforilata e quella “normale”.
Cells are treated with SBE13 one day after subculturing. Control cells are incubated with normal culture medium. Concentrations of SBE13 ranged from 1 nM–100 µM. The growth rate of 1 x 105 cells per 6-well is determined by counting cells at 24, 48 and 72 hours after treatment. Cell culture studies are performed in triplicate for each time point.
Riferimenti
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20139717/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21301227/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24810255/
Sellecks SBE 13 HCl È stato citato da 5 Pubblicazioni
Inhibition of Polo-like kinase 1 (PLK1) facilitates the elimination of HIV-1 viral reservoirs in CD4 + T cells ex vivo
[ Sci Adv, 2020, 6(29):eaba1941]
SF3B1 deficiency impairs human erythropoiesis via activation of p53 pathway: implications for understanding of ineffective erythropoiesis in MDS
[ J Hematol Oncol, 2018, 11(1):19]
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