Zotiraciclib

SB1317/TG02 inibisce la proliferazione di tutte le linee cellulari testate, comprese le linee cellulari di tumori solidi come il colon (HCT-116, COLO205) e la prostata (DU145) con IC50 di 33 nM, 72 nM e 140 nM, rispettivamente. SB1317/TG02 inibisce potentemente il biomarcatore CDK2 pRb (fosfo-Rb, proteina soppressore tumorale del retinoblastoma) nelle cellule HCT-116, e gli effetti possono essere rilevati a 40 nM con la fosforilazione proteica completamente inibita a 200 nM. SB1317/TG02 è potente contro pRb nelle cellule MV4-11 con IC50 di 0.13 μM e inibisce anche pFLT3 e pSTAT5 nella stessa linea cellulare. SB1317/TG02 determina una permeabilità (Papp) di 26h nella direzione apicale a basolaterale (Papp,A→B) e nella direzione basolaterale a apicale (Papp,B→A) di 28.0 × 10^-6 cm/s e 27.4 ×10^-6 cm/s, rispettivamente, nei saggi di permeabilità bidirezionale Caco-2. SB1317/TG02 risulta essere stabile con un'emivita di 45 min nei microsomi epatici umani (HLM), è moderatamente stabile nei DLM (t_1/2 = 33 min), ed è eliminato piuttosto rapidamente nei MLM (t_1/22 = 12 min) e nei RLM (t_1/2 = 11 min). [1] TG02 inibisce più potentemente le isoforme di CDK, inibisce CDK1, CDK2, CDK3, CDK5 e CDK9 con IC50 di 9 nM, 5 nM, 8 nM, 4 nM e 3 nM, rispettivamente. TG02 inibisce anche Lck, TYK2, Fyn, JAK2 e FLT3 con IC50 di 11 nM, 14 nM, 15 nM, 19 nM e 19 nM, rispettivamente. TG02 ha effetti antiproliferativi più potenti di SNS-032 nelle linee cellulari tumorali. TG02 mostra una più forte inibizione del pannello di tumori liquidi con IC50 di 0.13 μM rispetto al pannello di tumori solidi con IC50 di 0.30 μM. TG02 (100 nM) induce l'arresto del Cell Cycle e l'apoptosi nelle cellule MV4-11. TG02 inibisce pRb, pFLT3 e pSTAT5 con IC50 di 125 nM, 4.7 μM e 560 nM, rispettivamente, nelle cellule MV4-11. TG02 inibisce pJAK2 (Y1007/8) e pSTAT3 con IC50 di 63 nM e 53 nM, rispettivamente, nelle cellule Karpas 1106P. L'esposizione a TG02 (300 nM) porta all'inibizione di CDK9, seguita da arresto in fase G1 e induzione apoptotica, nelle cellule HL-60. [2]

SB1317/TG02 è altamente legato alle proteine plasmatiche nel plasma umano, di topo e di cane con PPB che varia tra 99,4% e 99,9%. SB1317/TG02 mostra una biodisponibilità orale (F) del 4% e 37% in ratti e cani, rispettivamente. SB1317/TG02 (75 mg/kg, per via orale) mostra un rapido assorbimento (t_max = 0,5 h) e una Cmax e AUC medie di 1029 ng/mL e 2523 ng•h/mL, rispettivamente, con un'emivita terminale media di 6,1 ore e una biodisponibilità orale del 24% nei topi. SB1317/TG02 (75 mg/kg po q.d. 3×/settimana) inibisce significativamente la crescita dei tumori con un TGI medio dell'82% in un modello di xenotrapianto sottocutaneo murino di cancro al colon umano (HCT-116), mentre la dose più bassa di 50 mg/kg po 3×/settimana è marginalmente efficace. SB1317/TG02 (75 mg/kg po, 15 mg/kg ip) inibisce significativamente la crescita dei tumori con TGI medi del 42% e 63% per i metodi di somministrazione orale e ip, rispettivamente, in un modello di xenotrapianto sottocutaneo murino di linfoma a cellule B umane (Ramos). [1] TG02 (60 mg/kg) viene selettivamente trattenuto a livelli sovra-terapeutici e inibisce efficacemente CDK2, CDK9 e FLT3 in vivo, causando apoptosi nei tessuti tumorali, nei tessuti tumorali di topi nudi portatori di tumori MV4-11. TG02 (10 mg/kg, 20 mg/kg e 40 mg/kg) porta a un'inibizione della crescita tumorale del 53%, 61% e 113%, rispettivamente, nei topi nudi portatori di tumori MV4-11. [2]

• Saggi enzimatici

  Tutti i saggi sono condotti in piastre per microtitolazione bianche a 384 pozzetti utilizzando il sistema di saggio PKLight. Il TG02 è testato a otto concentrazioni preparate da diluizioni seriali di 3 o 4 volte a partire da 10 μM. Per il saggio CDK2/ciclina A, la miscela di reazione è composta dai seguenti componenti in 25 μL di tampone di saggio (50 mM Hepes, pH 7.5, 10 mM MgCl₂, 5 mM MnCl₂, 5 mM BGP, 1 mM DTT, 0.1 mM ortovanadato di sodio), 1.4 μg/mL di complesso CDK2/ciclina A, 0.5 μM di substrato RbING e 0.5 μM di ATP. La miscela viene incubata a temperatura ambiente per 2 ore. Quindi vengono aggiunti 13 μL di reagente di rilevamento ATP PKLight e la miscela viene incubata per 10 min. I segnali di luminescenza vengono rilevati su un lettore di piastre multilabel. Gli altri saggi chinasici sono simili, con le seguenti differenze nei reagenti: Per i saggi FLT3, la miscela contiene 2.0 μg/mL di enzima FLT3, 5 μM di substrato poli(Glu,Tyr) e 4 μM di ATP. Per i saggi JAK2, la reazione contiene 0.35 μg/mL di enzima JAK2, 10 μM di substrato poli(Glu,Ala,Tyr) e 0.15 μM di ATP. Il software analitico Prism 5.0 viene utilizzato per generare i valori di IC50 dai dati.

• Linee cellulari

  HCT-116, COLO205 and DU145 cell lines

• Concentrazioni

  ~10 μM

• Tempo di incubazione

  48 hours

• Metodo

  For proliferation assays in 96-well plates, 2×10⁵ cells are seeded in 100 μL of medium and treated the following day with TG02 (in triplicate) at concentrations up to 10 μM for 48 hours. Cell viability is monitored using the CellTiter-96 Aqueous One solution cell proliferation assay. Dose-response curves are plotted to determine IC50 values for TG02 using the XL-fit software.

• Modelli animali

  Murine sc xenograft model of human colon cancer (HCT-116)

• Dosaggi

  75 mg/kg

• Somministrazione

  orally