SB505124

SB505124 è identificato come un inibitore di ALK reversibile, competitivo con l'ATP e selettivo per ALK4 e ALK5. Questo composto non mostra tossicità per le cellule epiteliali renali A498 a concentrazioni fino a 100 μM per 48 ore e blocca l'apoptosi indotta da TGF-β delle cellule FaO e delle cellule NRP 154 in modo concentrazione-dipendente. [1] Nelle cellule endoteliali della vena ombelicale umana (HUVEC), questa sostanza chimica (500 nM) blocca le modificazioni di TGF-β1 sull'assemblaggio di F-actina e previene la produzione di ROS indotta da TGF-β. [2] Inibendo la segnalazione di TGF-beta1, porta a una ridotta neurogenesi indotta da (DFO). [3] Uno studio recente mostra che questo inibitore sopprime la migrazione e l'invasione delle cellule MCF-7-M5 di carcinoma mammario. [4]

In un modello GFS di coniglio, SB505124 ha diminuito i livelli di pressione intraoculare (IOP) e ridotto l'infiltrazione cellulare sottocongiuntivale e la cicatrizzazione nel sito chirurgico del GFS. [5] In topi trattati con (TAC) e topi KO FK12EC, questo composto previene l'attivazione dei recettori endoteliali di TGF-β e l'induzione di ialinosi arteriolare renale. [6]

• Saggio in vitro di protein chinasi

  I saggi chinasi vengono eseguiti come descritto da Laping et al., 2002 utilizzando il dominio chinasi di ALK5 e GST-Smad3 a lunghezza intera fuso all'N-terminale. I saggi chinasi vengono eseguiti con 65 nM di GST-ALK5 e 184 nM di GST-Smad3 in 50 mM HEPES, 5 mM MgCl₂, 1 mM CaCl₂, 1 mM ditiotreitolo e 3 μM ATP. Le reazioni vengono incubate con 0,5 μCi di [³³P]γATP per 3 ore a 30 °C. La proteina fosforilata viene catturata su carta P-81, lavata con acido fosforico allo 0,5% e contata per scintillazione liquida. In alternativa, la proteina Smad3 o Smad1 viene anche rivestita su FlashPlate Sterile Basic Microplates. I saggi chinasi vengono quindi eseguiti in FlashPlates con le stesse condizioni di saggio utilizzando il dominio chinasi di ALK5 con Smad3 come substrato o il dominio chinasi di ALK6 (recettore BMP) con Smad1 come substrato. Le piastre vengono lavate tre volte con tampone fosfato e contate con TopCount.

• Linee cellulari

  A498, FaO and NRP 154 cells

• Concentrazioni

  0-10 μM

• Tempo di incubazione

  48 hours

• Metodo

  Cell viability is measured as described by Laping et al., 2002 or by using the modified tetrazolium salt WST-1. XTT assay: The cells are serum-deprived for 24 hours and then treated with SB505124 for 48 hours to assess the cellular toxicity. Cell viability is determined by incubating cells for 4 hours with XTT labeling and electron coupling reagent according to the manufacturer's directions. Live cells with active mitochondria produce an orange-colored product, formazan, which is detected using a plate reader at between A450 nm and A500 nm with a reference wavelength greater than 600 nm. The absorbance values correlate with the number of viable cells. Modified tetrazolium salt WST-1: Approximately 2000 cells are seeded in 96-well dishes in 100 μL of 0.2% FBS phenol red-free media overnight. The cells are treated with 50 μL of this compound (to achieve the final concentrations indicated) for 30 minutes before being treated with or without TGF-β1 and TNF-α to a final volume of 200 μL. Cell growth is measured at the indicated time points by incubating each well with 10 μL of WST-1 for 3 hours at 37 °C. Metabolically active cells cleave WST-1 to water-soluble formazan, which is directly quantitated with an enzyme-linked immunosorbent assay plate reader. Each experiment is done at least twice, and treatment for each cell line is done in triplicate.

• Modelli animali

  New Zealand White (NZW) rabbits after glaucoma filtration surgery (GFS).

• Dosaggi

  Tablets containing 5 mg of SB505124.

• Somministrazione

  Administered via p.o.