SB415286

SB 415286 inibisce la GSK3α in modo ATP competitivo con K_i di 31 nM e mostra una potenza simile contro la GSK3β. Questo composto ha poca o nessuna attività contro altre 24 protein chinasi con IC50 > 10 μM. Stimola la sintesi del glicogeno nella linea cellulare epatica umana Chang con EC50 di 2,9 μM e induce l'espressione di un gene reporter regolato da β-catenina-LEF/TCF nelle cellule HEK293. [1] Protegge i neuroni del sistema nervoso centrale e periferico in coltura dalla morte indotta da una ridotta attività della via PI3-chinasi in modo concentrazione-dipendente, che è correlata all'inibizione dell'attività di GSK-3 e alla modulazione dei substrati di GSK-3 tau e β-catenina. [2] Nei miotubi L6, questa sostanza chimica induce un'attivazione molto maggiore della GS (6,8 volte) rispetto a quella indotta dall'insulina (4,2 volte) o dal Li (4 volte). [3] Questo composto (10 μM) inibisce la down-regulation della ciclina D1 indotta dalla rapamicina e blocca la rapamicina e l'apoptosi indotta, suggerendo un ruolo critico per GSK3β nella sensibilizzazione mediata dalla rapamicina. [4] Previene la morte cellulare indotta dal coxsackievirus in modo dose-dipendente tramite la stabilizzazione della β-catenina. [5] Questa sostanza chimica esercita un effetto protettivo sulla morte cellulare indotta da perossido di idrogeno in cellule di neuroblastoma di ratto B65 e neuroni, mentre il litio non attenua gli effetti tossici del perossido di idrogeno. [7] Il suo trattamento potenzia l'apoptosi indotta da TRAIL e CH-11 nelle cellule HepG2. [8] L'inibizione di GSK-3 da parte di questo composto provoca l'arresto della crescita e l'apoptosi delle cellule di mieloma multiplo (MM) attraverso l'attivazione della via intrinseca. [9] Diminuisce la vitalità delle cellule Neuro-2A e induce l'accumulo di cellule nella fase G2/M del ciclo cellulare e la successiva apoptosi. [10]

La somministrazione di SB 415286 (~10 mg/kg due volte al giorno) riduce l'estensione e il grado dell'infiammazione colica provocata dall'acido trinitrobenzenesolfonico (TNBS) nel ratto e riduce la diminuzione del peso corporeo, che è correlata alla down-regulation dell'attività di NF-κB, coinvolta nella generazione di mediatori proinfiammatori. [6] Il trattamento con questo composto a 1 mg/kg ritarda significativamente la crescita delle cellule Neuro-2A in vivo in topi nudi. [10]

• Dosaggio dell'attività di GSK-3

  L'attività chinasica di GSK-3 viene misurata, in presenza di varie concentrazioni di SB 415286, in una miscela di reazione contenente concentrazioni finali di: 1 nM di GSK3α umana o GSK3α di coniglio; 50 mM di MOPS pH 7,0; 0,2 mM di EDTA; 10 mM di Mg-acetato; 7,5 mM di L-mercaptoetanolo; 5% (p/v) di glicerolo; 0,01% (p/v) di Tween-20; 10% (v/v) di DMSO; 28 μM di substrato peptidico GS-2. La sequenza peptidica GS-2 corrisponde a una regione della glicogeno sintasi che è fosforilata da GSK-3. Il dosaggio viene avviato con l'aggiunta di 0,34 μCi di [³³P]γ-ATP (determinazioni IC50) o 2,7 μCi di [³³P]γ-ATP (determinazioni Ki). La concentrazione totale di ATP è di 10 μM (determinazioni IC50) o varia da 0 a 45 μM (determinazioni Ki). Dopo 30 minuti di incubazione a temperatura ambiente, il dosaggio viene interrotto con l'aggiunta di un terzo del volume del dosaggio di 2,5% (v/v) di H₃PO₄ contenente 21 mM di ATP. I campioni vengono spotted su tappetini di fosfocellulosa P30 e questi vengono lavati sei volte in 0,5% (v/v) di H₃PO₄. I tappetini filtranti vengono sigillati in sacchetti campione contenenti liquido di scintillazione Wallac betaplate. L'incorporazione di 33P nel peptide substrato viene determinata contando i tappetini in un contatore a scintillazione Wallac microbeta.

• Linee cellulari

  OPM-2, RPMI-8226, U-266, and INA-6

• Concentrazioni

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

• Tempo di incubazione

  48, or 72 hours

• Metodo

  Cells are exposed to different concentrations of SB 415286 for 48 or 72 hours in 96-flat well plates. After 48 or 72 hours, [³H]thymidine is added to the cultures (10 μCi/well) for the last 12 hours. The [³H]thymidine incorporation is evaluated by scintillation counting by using a top count β-counter. Apoptosis is assessed by annexin V/Propidium Iodide staining or by detection of mitochondrial membrane potential. Cell death is evaluated by the analysis of Forward/Side scatter fluorescence changes. Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS) analysis is performed using a FACS-Calibur Cell Cytometer.

• Modelli animali

  Male Wistar rats with acute colitis provoked by trinitrobenzene sulphonic acid (TNBS)

• Dosaggi

  ~1 mg/kg

• Somministrazione

  Administered subcutaneously twice daily