Ruxolitinib (INCB18424) Phosphate

INCB018424 inibisce potentemente e selettivamente la segnalazione e la proliferazione mediate da JAK2V617F nelle cellule Ba/F3 e HEL. INCB018424 aumenta marcatamente l'apoptosi in modo dose-dipendente nelle cellule Ba/F3. INCB018424 (64 nM) provoca un raddoppio delle cellule con mitocondri depolarizzati nelle cellule Ba/F3. INCB018424 inibisce la proliferazione dei progenitori eritroidi di donatori normali e pazienti con policitemia vera con IC50 di 407 nM e 223 nM, rispettivamente. INCB018424 dimostra una notevole potenza contro la formazione di colonie eritroidi con IC50 di 67 nM. [1]

INCB018424 (180 mg/kg, per via orale, due volte al giorno) si traduce in un tasso di sopravvivenza superiore al 90% entro il giorno 22 in un modello murino guidato da JAK2V617F. INCB018424 (180 mg/kg, per via orale, due volte al giorno) riduce marcatamente la splenomegalia e i livelli circolanti di citochine infiammatorie, ed elimina preferenzialmente le cellule neoplastiche, con conseguente prolungamento significativo della sopravvivenza senza effetti mielosoppressivi o immunosoppressivi in un modello murino guidato da JAK2V617F. [1] L'endpoint primario viene raggiunto nel 41,9% dei pazienti nel gruppo Ruxolitinib rispetto allo 0,7% nel gruppo placebo nello studio in doppio cieco sulla mielofibrosi. Ruxolitinib porta al mantenimento della riduzione del volume della milza e al miglioramento del 50% o più nel punteggio totale dei sintomi. [2] Un totale del 28% dei pazienti nel gruppo Ruxolitinib (15 mg due volte al giorno) presenta almeno una riduzione del 35% del volume della milza alla settimana 48 in pazienti con mielofibrosi, rispetto allo 0% nel gruppo che riceve la migliore terapia disponibile. La lunghezza media palpabile della milza è diminuita del 56% con Ruxolitinib, ma è aumentata del 4% con la migliore terapia disponibile alla settimana 48. I pazienti nel gruppo ruxolitinib hanno mostrato un miglioramento nelle misure complessive della qualità della vita e una riduzione dei sintomi associati alla mielofibrosi. [3]

• Saggio di legame

  Le proteine ricombinanti sono espresse utilizzando cellule Sf21 e vettori di baculovirus e purificate mediante cromatografia di affinità. I saggi di chinasi JAK utilizzano un saggio di fluorescenza risolta nel tempo omogeneo con il substrato peptidico (-EQEDEPEGDYFEWLE). Ogni reazione enzimatica viene eseguita con Ruxolitinib o controllo, enzima JAK, 500 nM di peptide, adenosina trifosfato (ATP; 1mM) e 2% di dimetilsolfossido (DMSO) per 1 ora. La concentrazione inibitoria al 50% (IC50) viene calcolata come la concentrazione di INCB018424 richiesta per l'inibizione del 50% del segnale fluorescente.

• Linee cellulari

  Ba/F3 and HEL cells

• Concentrazioni

  3 μM

• Tempo di incubazione

  48 h

• Metodo

  Cells are seeded at 2 × 10³/well of white bottom 96-well plates, treated with INCB018424 from DMSO stocks (0.2% final DMSO concentration), and incubated for 48 hours at 37 ℃ with 5% CO₂. Viability is measured by cellular ATP determination using the Cell-Titer Glo luciferase reagent or viable cell counting. Values are transformed to percent inhibition relative to vehicle control, and IC50 curves are fitted according to nonlinear regression analysis of the data using PRISM GraphPad.

• Modelli animali

  JAK2V617F-driven mouse model

• Dosaggi

  180 mg/kg

• Somministrazione

  o.g.