In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile. * Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto. * Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)
Preparazione delle soluzioni stock
Attività biologica
Descrizione
Rofecoxib (MK-0966) è un inibitore della COX-2 con IC50 di 18 nM.
Target
COX-2
18 nM
In vitro
Il Rofecoxib inibisce la produzione di PGE2 dipendente da COX-2 nelle cellule di osteosarcoma umano con un IC50 di 26 nM. Questo composto è un inibitore tempo-dipendente della COX-2 ricombinante umana purificata con un IC50 di 0,34 μM. Provoca l'inibizione della COX-1 umana purificata in modo non tempo-dipendente. In un saggio su sangue intero umano, questa sostanza chimica inibisce selettivamente la sintesi di PGE2 derivata da COX-2, indotta da lipopolisaccaridi, con un valore IC50 di 0,53 μM rispetto a un valore IC50 di 18,8 μM per l'inibizione della sintesi di trombossano B2 derivata da COX-1 dopo la coagulazione del sangue. Inibisce moderatamente la O-deetilazione della fenacetina con un IC50 di 23 μM. E una preincubazione di 30 minuti con microsomi e NADPH aumenta considerevolmente l'effetto inibitorio di questo composto con un IC50 di 4,2 μM. L'inattivazione del CYP1A2 da parte del rofecoxib richiede NADPH ed è caratterizzata da un K i di 4,8 μM.
In vivo
Preparati microsomiali di COX-1 e COX-2 umane ricombinanti vengono preparati da un sistema di espressione cellulare vaccinia virus-COS-7. COX-1 e COX-2 umane ricombinanti vengono espresse in cellule di baculovirus-Sf9 e gli enzimi vengono purificati. L'attività enzimatica viene monitorata continuamente sia mediante un saggio di fluorescenza che misura la comparsa della forma ossidata dell'acido omovanillico, cosubstrato riducente, sia mediante consumo di ossigeno. Il saggio HPLC per la valutazione dell'inibizione della COX-1 purificata da parte di questo composto con una concentrazione di substrato di acido arachidonico di 0,1 μM, la determinazione della stechiometria del complesso tra COX-2 e questa sostanza chimica, la costante di velocità di dissociazione del complesso enzima-inibitore tramite recupero dell'attività enzimatica e il recupero intatto di questo composto da tale complesso sono tutti eseguiti come descritto in precedenza. Il sistema di solventi per l'analisi HPLC di questa sostanza chimica è 15:85 MeOH/fosfato di potassio acquoso (1 g/litro), con eluizione mediante un gradiente lineare dal 15 al 75% di MeOH per 25 minuti con rilevazione a 275 nm su una colonna Novapak C18.
Human osteosarcoma cell line and human lymphoma U937 cells
Concentrazioni
0.5 μM, 8 μM
Tempo di incubazione
15 minutes
Metodo
The human osteosarcoma cell line has been shown to selectively express COX-2 by reverse transcription-polymerase chain reaction and immunoblot analysis, whereas undifferentiated human lymphoma U937 cells selectively express COX-1. The production of PGE2 by these cells after arachidonic acid challenge is used as an index of cellular COX-2 and COX-1 activity, respectively. Rofecoxib is preincubated for 5 to 15 minutes with the cells under serum-free conditions [Hanks' balanced salt solution (HBSS)] before a 10-minutes stimulation with 10 μM arachidonic acid and measurement of PGE2 production. COX activity in each cell line is defined as the difference in PGE2 concentrations in samples incubated in the presence or absence of arachidonic acid.
Structural and functional screening in human induced-pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes accurately identifies cardiotoxicity of multiple drug types.
[Doherty KR, et al. Toxicol Appl Pharmacol, 2015, 285(1):51-60]
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