In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO
40%PEG300
5%Tween80
50%ddH2O
Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.
5.000mg/ml
(9.03mM)
Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 100 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution
5% DMSO
95% Corn oil
Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.
0.410mg/ml
(0.74mM)
Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 8.2 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile. * Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto. * Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)
Preparazione delle soluzioni stock
Attività biologica
Descrizione
Bisindolylmaleimide IX (Ro 31-8220 Mesylate) è un inibitore pan-PKC con IC50 di 5 nM, 24 nM, 14 nM, 27 nM e 24 nM per PKC-α, PKC-βI, PKC-βII, PKC-γ e PKC-ε, rispettivamente, e mostra anche una potente inibizione contro MAPKAP-K1b, MSK1, GSK3β e S6K1.
Target
PKCα (Cell-free assay)
PKCβ2 (Cell-free assay)
PKCβ1 (Cell-free assay)
PKCε (Cell-free assay)
PKCγ (Cell-free assay)
5 nM
14 nM
24 nM
24 nM
27 nM
In vitro
Ro 31-8220 inibisce l'attività della PKC nel cervello di ratto con IC50 di 23 nM e non mostra un alto grado di selettività tra PKC-α, PKC-β, PKC-γ e PKC-ε. Ro 31-8220 inibisce anche MSK1, MAPKAPK1, RSK, GSK3β e S6K1 con una potenza simile a quella per la PKC. Inoltre, Ro 31-8220 inibisce i canali Na+ voltaggio-dipendenti. Ro 31-8220 altera la localizzazione della proteina chinasi C cellulare e inibisce potentemente la crescita delle cellule A549 e MCF-7 con IC50 di 0,78 μM e 0,897 μM, rispettivamente. RO 31-8220 migliora l'aggregazione piastrinica indotta dall'epinefrina nelle piastrine ipo-responsivie alle catecolamine potenziando la fosforilazione di Akt. Ro 31-8220 diminuisce significativamente la secrezione di apoE dai macrofagi umani primari inibendo il trasporto vescicolare di apoE alla membrana plasmatica senza influenzare significativamente i livelli di mRNA di apoE o di proteina apoE.
In vivo
Nei topi MLP−/−, Ro 31-8220 (6 mg/kg/die, s.c.) provoca un aumento significativo della contrattilità cardiaca.
Le miscele di saggio contengono 0,2 mg/mL di peptide-gamma, 10 μM di MgCl2, 0,6 mM di CaCl2, 10 μM di [γ-32P]ATP, 1,25 mg/mL di fosfatidilserina e 1,25 ng/mL di forbolo 12-miristato 13-acetato in 20 mM Hepes (pH 7,5), 2 mM EDTA, 1 mM ditiotreitolo e 0,02% (p/v) di Triton X-100. Il peptide-γ è un peptide sintetico, GPRPLFCRKGSLRQKW, che assomiglia al sito pseudosubstrato della PKC-γ, tranne che un residuo di serina sostituisce l'alanina pseudosubstrato, convertendo il peptide da inibitore a substrato. I saggi vengono avviati con l'aggiunta di 2,5 m-unità di enzima, incubati a 30 °C per 10 min e terminati mediante spotting su carta P81, seguito da un lavaggio estensivo in acido ortofosforico al 75 mM. Le carte vengono quindi lavate in etanolo, asciugate e la radioattività incorporata viene determinata mediante spettroscopia a scintillazione liquida.
Human A549 lung and MCF-7 breast carcinoma cells are obtained from the European Collection of Animal Cell Cultures. Cells (passage number 10-30) are cultured in an atmosphere of 5% carbon dioxide, the former in Ham's F-12 medium with penicillin/streptomycin, the latter in minimum essential medium (Eagle's modification) with additional pyruvate (1 mM) and non-essential amino acids. Both media are supplemented with 10% FCS and glutamine (2 mM). Cells are subcultured routinely twice weekly to maintain logarithmic growth. For cell proliferation studies cells are seeded and incubated with 3 ml of medium including agents, which is replenished at intervals of 48 h (A549) or 72 h (MCF-7). Following incubation for 4 days (A549) or 6 days (MCF-7) with drugs, cell number is assessed using a Coulter Counter Model ZM. In order to achieve PKC depletion, cells are incubated for 24 h with bryostatin 1 (1 μM). Under these conditions growth inhibition caused by bryostatin 1 is negligible. Bryostatin is removed by extensive washing of the cells followed by a 2 h recovery period. In previous work using the A549 cell line this washing procedure has been shown to eliminate bryostatin-mediated effects. The cells are then incubated for a further 24 h with staurosporine, RO 31-8220, UCN-01 or H-7. In some experiments cells are incubated with inhibitor for 48 rather than 24 h, in this case bryostation was not removed and left in the incubate. After removal of agents inhibition of DNA synthesis is evaluated by measurement of [3H]Tdr incorporation into cell. Radioactivity is counted using a Packard 1500 Tricarb scintillation counter.
Alternative splicing of HDAC7 regulates its interaction with 14-3-3 proteins to alter histone marks and target gene expression
[ Cell Rep, 2023, 42(3):112273]
Naturally-derived diterpenoid sphaeropsidin C as an activator of Nrf2/ARE pathway and its potential capability of relieving intracellular oxidative stress in human lung epithelial cells.
[ Biomed Pharmacother, 2020, 121:109669]
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