RKI-1447

N. catalogoS7195 Lotto:S719501

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Dati tecnici

Formula

C16H14N4O2S
Peso molecolare 326.37 Numero CAS 1342278-01-6
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 65 mg/mL (199.16 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension
15% Captisol

Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.

 10.000mg/ml (30.64mM) Taking the 1 mL working solution as an example, take 10 mg of this product, add it to 1 ml of 15% Captisol clear solution, and mix evenly to form a uniform suspension. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.

 10.000mg/ml (30.64mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 200 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
Clear solution
5% DMSO 95% Corn oil

Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.

 0.250mg/ml (0.77mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 5 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione RKI-1447 è un potente inibitore di ROCK1 e ROCK2, con IC50 di 14,5 nM e 6,2 nM, rispettivamente, e possiede attività anti-invasive e antitumorali.
Target
ROCK2
(Cell-free assay)		 ROCK1
(Cell-free assay)
6.2 nM 14.5 nM
In vitro

RKI-1447 è un piridiltiazolil-urea permeabile alle cellule che agisce come un potente inibitore di Rho Chinasi che mira al sito ATP, mostrando una potenza molto ridotta contro PKA, PKN1/PRK1, p70S6K/RPS6kB1, AKT1, MRCKa/CDC42BPA (85,5%, 80,5%, 61,9%, 56,0% e 50,4% di inibizione, rispettivamente, da 1 µM di questo composto) o altre 15 chinasi. Le strutture cristalline del complesso di questo composto chimico/ROCK1 rivelano che questo inibitore è un inibitore chinasico di tipo I che si lega al sito di legame dell'ATP attraverso interazioni con la regione del cerniera e il motivo DFG. Sopprime la fosforilazione dei substrati ROCK MLC-2 e MYPT-1 nelle cellule tumorali umane, ma non ha avuto alcun effetto sui livelli di fosforilazione delle chinasi AKT, MEK e S6 a concentrazioni fino a 10 μM. Questo composto è anche altamente selettivo nell'inibire la riorganizzazione del citoscheletro mediata da ROCK (formazione di fibre di stress di actina) a seguito di stimolazione con LPA, ma non influenza la formazione di lamellipodi e filopodi mediata da PAK a seguito di stimolazione con PDGF e Bradichinina. Inibisce la migrazione, l'invasione e la crescita tumorale indipendente dall'ancoraggio delle cellule di cancro al seno.

In vivo

RKI-1447 è altamente efficace nell'inibire la crescita di tumori mammari in un modello murino transgenico. I tumori di topi trattati con questo composto aumentano di dimensioni con una variazione percentuale media del volume tumorale di solo l'8,8%. Pertanto, ha inibito la crescita del tumore mammario dell'87% e, in media, i tumori mammari dei I topi trattati con questa sostanza chimica sono 7,7 volte più piccoli rispetto ai tumori dei topi trattati con il controllo veicolo. I trattamenti con questo composto non comportano perdita di peso nei topi.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:

[2]
  • Saggio chinasico Z-Lyte FRET

    L'inibizione della chinasi viene misurata utilizzando il saggio chinasico Invitrogen Z-Lyte® FRET con substrato peptidico Ser/Thr 13 basato sulla sequenza della catena leggera della miosina KKRPQRRYSNVF. Questo composto viene testato in tre giorni separati con diluizioni a 8 punti eseguite in duplicato per determinare i valori medi di IC50. Le condizioni del saggio sono ottimizzate a 15 μL di volume di reazione della chinasi con 5 ng di enzima in 50 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA e 0,01% Brij-35. La reazione viene incubata per 1 ora a temperatura ambiente in presenza di 1,5 μM di substrato peptidico con 12,5 μM di ATP (per ROCK1) o 2 μM di substrato con 50 μM di ATP (per ROCK2).
Saggio cellulare:

[1]
  • Linee cellulari

    MDA-MB-231

  • Concentrazioni

    ~600 μM

  • Tempo di incubazione

    72 h

  • Metodo

    Cells are plated in a 96 well tissue culture plate (1200 cells per well) and incubated for 24 hours. After incubation the cells are treated with vehicle or increasing concentrations of RKI-1447 for 72 hours. After incubation, freshly prepared MTT (2mg/ml) is added to each well and incubated for 3 hours. After incubation the plates are read at 540 nm.
Studio sugli animali:

[1]
  • Modelli animali

    MMTV/neu transgenic mice [FVB/N-Tg (MMTVneu) 202 Mul/J]

  • Dosaggi

    200 mpk/day

  • Somministrazione

    i.p.

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22846914/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23275831/

Convalida del prodotto da parte del cliente

(d) ROCK inhibition blocks CC-RCC migration in a transwell assay. RCC10 or 786-O cells were treated with Y-27632, RKI 1447 or DMSO vehicle (as indicated) for 6 h. The assay was performed in duplicate and the experiment was repeated three times. Statistical analysis in (b-d) was performed using a paired t-test comparing each normalized dose to the negative control (*P<0.05, **P<0.01 and ***P<0.001); s.e.m.

Dati da [ , , Oncogene, 2016, 1-10. ]

Western blotting analysis of the indicated proteins in MSC-4H-FC cells treated with increasing concentrations of dasatinib, PF-573228, or RKI-1447 for 24 hours. β-Actin levels were used as loading control.

Dati da [ , , Neoplasia, 2018, 20(1):44-56 ]

The cells were treated with 5 μM of the PAK1-specific inhibitor IPA-3 or 1 μM of the ROCK1/2-specific inhibitor RKI-1447 for 24 h. Total cell lysates were immunoblotted with antibodies against p110β, p110δ, p-PAK1, PAK1, ROCK1, ROCK2, p-LIMK1, LIMK1 or β-actin, which served as an internal control. The results are representative of three independent experiments.

Dati da [ , , Anticancer Res, 2017, 37(4):1805-1818 ]

Sellecks RKI-1447 È stato citato da 12 Pubblicazioni

Therapeutic targeting of tumor spheroids in a 3D microphysiological renal cell carcinoma-on-a-chip system [ Neoplasia, 2023, 10.1016/j.neo.2023.100948] PubMed: 37944353
Correlating Basal Gene Expression across Chemical Sensitivity Data to Screen for Novel Synergistic Interactors of HDAC Inhibitors in Pancreatic Carcinoma [ Pharmaceuticals (Basel), 2023, 16(2)294] PubMed: 37259439
Establishment and characterization of immortalized sweat gland myoepithelial cells [ Sci Rep, 2022, 12(1):7] PubMed: 34997030
İnsan kornea endotel hücreleri üzerine farklı RHO kinaz inhibitörlerinin etkinliğinin araştırılması [ GCRIS, 2022, ] PubMed: none
Synapse-specific Lrp4 mRNA enrichment requires Lrp4/MuSK signaling, muscle activity and Wnt non-canonical pathway [ Cell Biosci, 2021, 11(1):105] PubMed: 34090516
RKI-1447 suppresses colorectal carcinoma cell growth via disrupting cellular bioenergetics and mitochondrial dynamics. [ J Cell Physiol, 2020, 235(1):254-266] PubMed: 31237697
A novel human colon signet-ring cell carcinoma organoid line: establishment, characterization and application [ Carcinogenesis, 2020, 41(7):993-1004] PubMed: 31740922
[ Cell Rep, 2019, ] PubMed: 31825822
FUS-CHOP Promotes Invasion in Myxoid Liposarcoma through a SRC/FAK/RHO/ROCK-Dependent Pathway [Tornin J Neoplasia, 2018, 20(1):44-56] PubMed: 29190494
Prominent oncogenic roles of EVI1 in breast carcinoma [Wang H Cancer Res, 2017, 77(8):2148-2160] PubMed: 28209621

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