Regorafenib Hydrochloride

Regorafenib previene fortemente l'autofosforilazione di VEGFR2 nelle cellule NIH-3T3/VEGFR2 con IC50 di 3 nM. Nelle HAoSMCs, regorafenib sopprime l'autofosforilazione di PDGFR-β dopo stimolazione con PDGF-BB, con una IC50 di 90 nM. Regorafenib inibisce anche la segnalazione di FGFR nelle cellule di cancro al seno (BC) MCF-7 stimolate con FGF10. Regorafenib ha inibito molto potentemente i recettori mutanti KIT^K642E e RET^C634W, con IC50 di circa 20 nM e 10 nM, rispettivamente. Regorafenib inibisce la proliferazione delle HUVEC stimolate da VEGF¹⁶⁵, con una IC50 di circa 3 nM. Regorafenib previene la proliferazione delle HUVEC stimulate da FGF2 e delle HAoSMC stimolate da PDGF-BB con IC50 di 127 nM e 146 nM, rispettivamente. [1] Regorafenib mira sia alla proliferazione delle cellule tumorali che alla vascolarizzazione tumorale attraverso l'inibizione dei recettori delle Protein Tyrosine Kinase (VEGFR, KIT, RET, FGFR e PDGFR) e delle serina/treonina chinasi (Raf e p38MAPK). [2] Regorafenib sopprime la crescita delle cellule umane Hep3B, PLC/PRF/5 e HepG2 in modo dipendente dalla concentrazione e dal tempo. [3]

Regorafenib rivela una potente TGI dose-dipendente in vari modelli preclinici di xenotrapianto umano in topi, con riduzioni tumorali nei modelli di carcinoma mammario MDA-MB-231 e renale 786-O. Regorafenib previene non solo la crescita di tumori mammari primari singenici 4T1 che crescono ortotopicamente nel cuscinetto adiposo, ma sopprime anche la formazione di metastasi tumorali nel polmone. [1]

• Saggi chinasici

  Vengono eseguiti saggi in vitro utilizzando i domini chinasici ricombinanti di VEGFR2 (murino aa785–aa1367), VEGFR3 (murino aa818–aa1363), PDGFRβ (aa561–aa1106), Raf-1 (aa305–aa648) e BRafV600E (aa409–aa765). Il profilo iniziale dell'inibizione chinasica in vitro viene eseguito a una concentrazione fissa di 1 μM di Regorafenib. I valori della concentrazione inibitoria del 50% (IC50) vengono determinati da chinasi selezionate che rispondono, ad esempio, VEGFR1 e RET. L'inibizione della chinasi TIE2 viene misurata con un saggio di fluorescenza risolta nel tempo omogenea (HTRF) utilizzando una proteina di fusione ricombinante di glutatione-S-transferasi, il dominio intracellulare di TIE2 e il peptide biotina-Ahx-EPKDDAYPLYSDFG come substrato.

• Linee cellulari

  GIST 882 and TT cells

• Concentrazioni

  5-10 μM

• Tempo di incubazione

  96 h

• Metodo

  For proliferation assays, GIST 882 and TT cells are grown in RPMI medium containing L-glutamine, and MDA-MB-231, HepG2 and A375 cells in DMEM always containing 10% hiFBS. Cells are trypsinized, plated at 5×10⁴ cells/well in 96-well plates in complete media containing 10% FBS and grown overnight at 37 °C. The next day, vehicle or Regorafenib serially diluted in complete growth media to between 10 μM and 5 nM final concentrations, and 0.2% DMSO, is added and incubation is continued for 96 hours. Cell proliferation is quantified.

• Modelli animali

  Female athymic NCr nu/nu mice with Colo-205, MDA-MB-231 or 786-O

• Dosaggi

  3 mg/kg, 10 mg/kg, 30 mg/kg, 100 mg/kg

• Somministrazione

  o.g.