Regorafenib (BAY 73-4506)

Regorafenib previene fortemente l'autofosforilazione di VEGFR2 in cellule NIH-3T3/VEGFR2 con IC50 di 3 nM. Nelle HAoSMCs, questo composto sopprime l'autofosforilazione di PDGFR-β dopo stimolazione con PDGF-BB, con un IC50 di 90 nM. Inibisce anche la segnalazione di FGFR nelle cellule di cancro al seno (BC) MCF-7 stimolate con FGF10. Questa sostanza chimica ha inibito molto potentemente i recettori mutanti KIT^K642E e RET^C634W, con IC50 di circa 20 nM e 10 nM, rispettivamente. Inibisce la proliferazione delle HUVEC stimolate da VEGF¹⁶⁵, con un IC50 di circa 3 nM. Questo composto previene la proliferazione delle HUVEC stimolate da FGF2 e delle HAoSMC stimulate da PDGF-BB con IC50 di 127 nM e 146 nM, rispettivamente. [1] Si rivolge sia alla proliferazione delle cellule tumorali che alla vascolarizzazione tumorale attraverso l'inibizione dei recettori delle Protein Tyrosine Kinase (VEGFR, KIT, RET, FGFR e PDGFR) e delle serina/treonina chinasi (Raf e p38MAPK). [2] Questa sostanza chimica sopprime la crescita delle cellule umane Hep3B, PLC/PRF/5 e HepG2 in modo concentrazione- e tempo-dipendente. [3]

Regorafenib rivela un potente TGI dose-dipendente in vari modelli preclinici di xenotrapianto umano nei topi, con restringimenti tumorali nei modelli di carcinoma mammario MDA-MB-231 e renale 786-O. Questo composto previene non solo la crescita dei tumori primari del seno 4T1 singenici che crescono ortotopicamente nel cuscinetto adiposo, ma sopprime anche la formazione di metastasi tumorali nel polmone. [1]

• Saggi chinasici

  Vengono eseguiti saggi in vitro utilizzando i domini chinasi ricombinanti di VEGFR2 (murino aa785–aa1367), VEGFR3 (murino aa818–aa1363), PDGFRβ (aa561–aa1106), Raf-1 (aa305–aa648) e BRafV600E (aa409–aa765). La profilazione iniziale dell'inibizione chinasica in vitro viene eseguita a una concentrazione fissa di 1 μM di questo composto. I valori di concentrazione inibitoria del 50% (IC50) sono determinati dalle chinasi rispondenti selezionate, ad esempio, VEGFR1 e RET. L'inibizione della chinasi TIE2 viene misurata con un saggio di fluorescenza omogenea risolta nel tempo (HTRF) utilizzando una proteina di fusione ricombinante di glutatione-S-transferasi, il dominio intracellulare di TIE2 e il peptide biotina-Ahx-EPKDDAYPLYSDFG come substrato.

• Linee cellulari

  GIST 882 and TT cells

• Concentrazioni

  5 nM-10 μM

• Tempo di incubazione

  96 hours

• Metodo

  For proliferation assays, GIST 882 and TT cells are grown in RPMI medium containing L-glutamine, and MDA-MB-231, HepG2 and A375 cells in DMEM always containing 10% hiFBS. Cells are trypsinized, plated at 5×10⁴ cells/well in 96-well plates in complete media containing 10% FBS and grown overnight at 37 °C. The next day, vehicle or Regorafenib serially diluted in complete growth media to between 10 μM and 5 nM final concentrations, and 0.2% DMSO, is added and incubation is continued for 96 hours. Cell proliferation is quantified.

• Modelli animali

  Female athymic NCr nu/nu mice with Colo-205, MDA-MB-231 or 786-O

• Dosaggi

  3 mg/kg, 10 mg/kg, 30 mg/kg, 100 mg/kg

• Somministrazione

  Orally