Refametinib (RDEA119)

N. catalogoS1089 Lotto:S108902

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Dati tecnici

Formula

C19H20F3IN2O5S
Peso molecolare 572.34 Numero CAS 923032-37-5
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (174.72 mM)
Ethanol 100 mg/mL (174.72 mM)
Water Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.

 5.000mg/ml (8.74mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 100 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution
5% DMSO 95% Corn oil

Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.

 0.710mg/ml (1.24mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 14.2 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione Refametinib (RDEA119, Bay 86-9766) è un potente inibitore non competitivo dell'ATP e altamente selettivo di MEK1 e MEK2 con IC50 di 19 nM e 47 nM, rispettivamente.
Target
MEK1
(Cell-free assay)		 MEK2
(Cell-free assay)
19 nM 47 nM
In vitro Refametinib (RDEA119) si lega selettivamente e direttamente a una tasca allosterica degli enzimi MEK1/2 ed è altamente efficace nell'inibire la proliferazione cellulare in diverse linee cellulari tumorali, tra cui A375, SK-MEI-28, Colo205, HT-29 e BxPC3. Inibisce la crescita dipendente dall'ancoraggio di linee cellulari di cancro umano che ospitano la mutazione BRAF V600E con guadagno di funzione con valori di GI50 che vanno da 67 a 89 nM. In condizioni indipendenti dall'ancoraggio, i valori di GI50 per tutte le linee cellulari testate sono simili (40-84 nM). Questo composto mostra una selettività tissutale che riduce il suo potenziale di effetti collaterali correlati al sistema nervoso centrale. Inibisce potentemente la proliferazione delle 4 linee cellulari che ospitavano la mutazione BRAF ma non ha effetti o effetti modesti sulle altre 4 cellule che ospitavano BRAF di tipo selvatico (IC50 di 0,034-0,217 μM contro 1,413-34,120 μM). L'effetto inibitorio di Refametinib nelle linee cellulari selezionate OCUT1 (BRAF V600E(+), PIK3CA H1047R(+)) e SW1376 (BRAF V600E(+)) è potenziato dalla combinazione con l'inibitore di mTOR, temsirolimus. Il Refametinib e il temsirolimus mostrano anche effetti sinergici sulla morte autofagica delle cellule OCUT1 e KAT18 testate selettivamente.
In vivo La somministrazione orale di RDEA119 a 50 mg/kg una volta al giorno per 14 giorni porta a un'inibizione della crescita tumorale (TGI) del 68% nel modello tumorale di melanoma umano A375. Questo composto a 25 mg/kg una volta al giorno per 14 giorni determina una TGI del 123% nel modello tumorale di carcinoma del colon umano Colo205 (una TGI > 100% si verifica quando il tumore si riduce al di sotto del suo volume iniziale). Una dose di 25 mg/kg una volta al giorno per 14 giorni produce una TGI del 56% e 67% per i tumori HT-29 e A431, rispettivamente.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:

[1]
  • Saggio chinasi MEK

    La chinasi inattiva murina ERK2 (mERK2) K52A/T183A viene purificata per affinità da Escherichia coli espressa utilizzando il vettore pET21a. L'attività della chinasi MEK1 viene determinata utilizzando mERK2 K52A T183A come substrato. L'enzima MEK1 ricombinante (5 nM) viene prima attivato da 0,02 unità o 1,5 nM di RAF1 in presenza di 25 mM HEPES (pH 7,8), 1 mM MgCl2, 50 mM NaCl, 0,2 mM EDTA e 50 μM ATP per 30 minuti a 25 °C. Le reazioni vengono avviate aggiungendo 2 μM di mERK2K52A T183A e 2,5 μCi [γ-33P] ATP in un volume totale di 20 μL. L'attività della chinasi MEK2 viene determinata in modo simile, tranne per il fatto che l'attivazione da parte di RAF1 non è necessaria e vengono utilizzati 11 nM di enzima MEK2 (attivo) nei saggi. La profilazione delle chinasi per Refametinib (RDEA119) viene eseguita da Invitrogen utilizzando il loro servizio Select Screen Kinase Profiling. Viene utilizzato il saggio biochimico Z'-LYTE. Questo composto viene saggiato in quadruplicato a 10 μM contro 205 chinasi.
Saggio cellulare:

[1]
  • Linee cellulari

    A375, SK-MEI-28, Colo205, HT-29 and BxPC3 cells

  • Concentrazioni

    10-1000 nM

  • Tempo di incubazione

    48 hours

  • Metodo

    For anchorage-dependent growth inhibition experiments, cells are plated in white 384-well plates at 1,000/20 μL/well or white 96-well microplates at 4,000/100 μL/well. After 24-h incubation at 37 °C, 5% CO2, and 100% humidity, Refametinib (RDEA119) is incubated for 48 hours at 37 °C and assayed using CellTiter-Glo. For the 96-well anchorage-independent growth assay, wells of an “ultralow binding” plate (Corning) are filled with 60 μL of a 0.15% agarose solution in complete RPMI 1640. Then, 60 μL of complete RPMI 1640 containing 9,000 cells in 0.15% agarose are added per well. After 24 hour, 60 μL of a 3 × drug solution in agarose-free complete RPMI 1640 are added. After 7 d, 36 μL of 6 × 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)- 2H-tetrazolium, inner salt reagent are added per well. After 2 hours at 37 °C, absorbance at 490 nm is determined on the M5 plate reader.
Studio sugli animali:

[1]
  • Modelli animali

    Female athymic nude mice are injected s.c. with A375, HT-29 and A431 tumor; male athymic nude mice with Colo205 tumor.

  • Dosaggi

    25 or 50 mg/kg

  • Somministrazione

    Orally once daily for 14 days

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19706763/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21351275/

Convalida del prodotto da parte del cliente

RDEA119 (1 µM) or JTP-74057 (0.1 µM) abolished the effects of G1 on DAPK1 and NR2B phosphorylation.

Dati da [ , , J Neurosci, 2012, 32(14): 4887-900 ]

Western blot analyses of downstream effector proteins of the MAPK signaling pathway. The panel of CRC cell lines was treated with or without refametinib (1 lM) for 72 h. a-Tubulin served as a loading control.

Dati da [ , , Mol Oncol, 2018, 12(8):1398-1409 ]

B: ERK and p-ERK1/2 levels in response to MEKi treatment. Tra = trametinib, Ref = refametinib, Sel = selumetinib, Bin = binimetinib. Films were intentionally overexposed to detect signal in lanes with low p-ERK1/2 expression. For each cell line all treatment conditions were performed as part of the same experiment. All experimental findings were confirmed in independent experiments performed in triplicate. Note: membranes incubated with p-ERK1/2 antibody were overexposed to capture all remaining signal after MEKi treatment. WB images have been cut to keep the same sample order. All membranes incubated with the same antibody have been exposed for the same period of time.

Dati da [ , , Am J Cancer Res, 2016, 6(10):2235-2251 ]

MEK inhibition of hypoosmolar-induced ADM. In all panels KrasG12D acinar explants were isolated and starved overnight. The next day explants were incubated with hypoosmotic (150 mOsm) medium for 5 min and then refametinib was added at the indicated concentrations. (A) HRP assay from two mice was performed immediately after the 5 min hypoosmotic treatment. Mean ± SD, two-tailed t-test. (B) Acinar explants were seeded in collagen and ADM was quantified at day 4. N = number of mice. Mean ± SD, two-tailed t-test. (C) Representative bright field images of acinar explants described in B. Dashed lines highlight acinar cell clusters, arrowheads: duct-like structures. Scale bars = 50 μm.

Dati da [ , , EBioMedicine, 2017, 15:90-99 ]

Sellecks Refametinib (RDEA119) È stato citato da 29 Pubblicazioni

System analysis links SMARCD3 regulons to growth signaling and MEK inhibitor response in everolimus-resistant ER+ breast cancer cells [ Cell Rep Med, 2025, 6(11):102425] PubMed: 41260207
Histone deacetylase inhibitors promote breast cancer metastasis by elevating NEDD9 expression [ Signal Transduct Target Ther, 2023, 8(1):11] PubMed: 36604412
Salmonella effector SopB reorganizes cytoskeletal vimentin to maintain replication vacuoles for efficient infection [ Nat Commun, 2023, 14(1):478] PubMed: 36717589
Signaling-induced systematic repression of miRNAs uncovers cancer vulnerabilities and targeted therapy sensitivity [ Cell Rep Med, 2023, S2666-3791(23)00367-1] PubMed: 37734378
Signaling-induced systematic repression of miRNAs uncovers cancer vulnerabilities and targeted therapy sensitivity [ Cell Rep Med, 2023, 4(10):101200] PubMed: 37734378
Protein Tyrosine Phosphatase Non-Receptor 11 (PTPN11/Shp2) as a Driver Oncogene and a Novel Therapeutic Target in Non-Small Cell Lung Cancer (NSCLC) [ Int J Mol Sci, 2023, 24(13)10545] PubMed: 37445722
Anatomic position determines oncogenic specificity in melanoma [ Nature, 2022, 604(7905):354-361] PubMed: 35355015
NOTCH signaling limits the response of Low Grade Serous Ovarian Cancers to MEK inhibition [ Mol Cancer Ther, 2022, MCT-22-0004] PubMed: 36198031
Secondary resistance to anti-EGFR therapy by transcriptional reprogramming in patient-derived colorectal cancer models [ Genome Med, 2021, 13(1):116] PubMed: 34271981
Targeting the PI3K and MAPK pathways to improve response to HER2-targeted therapies in HER2-positive gastric cancer [ J Transl Med, 2021, 19(1):184] PubMed: 33933113

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