RAF709

N. catalogoS8690 Lotto:S869001

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Dati tecnici

Formula

C₂₈H₂₉F₃N₄O₄

Peso molecolare

542.55

Numero CAS

1628838-42-5

Solubilità (25°C)*

In vitro

DMSO

100 mg/mL (184.31 mM)

Ethanol

100 mg/mL (184.31 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.	5.000mg/ml (9.22mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 100 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.	0.800mg/ml (1.47mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 16 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione

RAF709 è un potente inibitore della chinasi B/C RAF con valori di IC50 quasi equivalenti di 0,4 nM per B-RAF e C-RAF, mostrando un alto livello di selettività, dimostrando una legame on-target superiore al 99% a BRAF, BRAFV600E e CRAF a 1 M e pochissimi off-target con DDR1 (>99%), DDR2 (86%), FRK (92%) e PDGFRb (96%), le uniche chinasi con legame >80% a 1 M.

Target

C-Raf (Cell-free assay)	BRAF(V600E) (Cell-free assay)	B-Raf (Cell-free assay)
0.4 nM	1 nM	1.5 nM

In vitro

RAF709 sembra avere una cinetica di dissociazione molto lenta (T_1/2 > 6,5 h) utilizzando il metodo di diluizione rapida per misurare la sua costante di velocità di dissociazione. Negli esperimenti cellulari, la dose-risposta di pMEK e pERK è misurata in cellule Calu-6 con EC50 di 0,02 e 0,1 M con minima attivazione paradossale e inibizione della proliferazione con EC50 di 0,95 M. Questo composto stabilizza i dimeri BRAF-CRAF con una EC50 di 0,8 M. Delle 456 chinasi testate, questa sostanza chimica mostra un alto livello di selettività, dimostrando un legame on-target superiore al 99% a BRAF, BRAFV600E e CRAF a 1 M e pochissimi off-target con DDR1 (>99%), DDR2 (86%), FRK (92%) e PDGFRb (96%), le uniche chinasi con legame >80% a 1 M. Mostra uguale attività contro entrambi i monomeri e i dimeri RAF. Nei saggi biochimici in vitro, questo composto esibisce una potente attività inibitoria mirata a BRAF, BRAFV600E e CRAF con valori di IC50 compresi tra 0,3 e 1,5 nmol/L. Questo trattamento chimico porta a un'induzione dose-dipendente dell'eterodimerizzazione B/CRAF in HCT116, ma inibisce la fosforilazione di MEK e ERK, in linea con la capacità di questo composto di inibire efficacemente i dimeri RAF. Inibisce selettivamente la segnalazione oncogenica e la proliferazione nelle cellule tumorali con mutazioni BRAF, NRAS o KRAS con minima attivazione paradossale.

In vivo

RAF709 è ben tollerato ed efficace nei modelli di xenotrapianto con mutazione KRAS. È ragionevolmente stabile nel plasma dopo un'incubazione di 3 ore a 37 in tutte le specie [stabilità plasmatica (% rimanente): ratto 85%, topo 82%, cane 95%, umano 101%], e il legame alle proteine plasmatiche è misurato al 98% in tutte le specie. Negli esperimenti farmacocinetici, questo composto ha una clearance moderata nel topo (35 mL/min/kg) e nel cane (14 mL/min/kg) e una clearance elevata nel ratto (50 mL/min/kg). I valori di Cmax nel topo (1 M), nel cane (0,5 M) e nel ratto (0,5 M) raggiungono concentrazioni farmacologicamente attive, e una accettabile disponibilità orale è osservata nel topo (68%), nel ratto (24%) e nel cane (48%). Nel modello murino nudo di xenotrapianto Calu-6, il trattamento con questa sostanza chimica porta a un'attività antitumorale dose-dipendente con 10 mg/kg subefficaci (%T/C = 92%), 30 mg/kg hanno portato a un'attività antitumorale misurabile (% T/C = 46%), e 200 mg/kg hanno portato a una regressione tumorale media del 92%, mentre la stessa dose elevata non è efficace nel modello PC3, KRAS WT.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:^{^[1]}	Saggio della chinasi CRAF Il saggio della chinasi CRAF è stato condotto utilizzando 10 nM di substrato proteico MEK1 inattivo dalla chinasi (portante una mutazione K97R), 3 M di ATP e 10 pM di CRAF Y340E/Y341E. Il tampone di reazione conteneva 50 mM Tris pH 7,5, 10 mM MgCl2, 0,05% BSA, 50 mM NaCl, 0,01% Tween-20 e 1 mM DTT. Le reazioni sono state condotte a temperatura ambiente in un volume di 10 L in piastre a 384 pozzetti a fondo poco profondo per 40 min e interrotte aggiungendo 5 L/pozzetto di soluzione di quenching (50 mM Tris pH 7,5, 50 mM EDTA). Le reazioni terminate hanno ricevuto 5 L/pozzetto di reagenti di rilevamento costituiti da 50 mM Tris pH 7,5, 0,01% Tween-20, anticorpo anti-fosfo MEK1/2 S217/S221 diluito 1:1000, 0,01 mg/mL ciascuno di sfere accettrici rivestite di proteina A AlphaScreen e sfere donatrici rivestite di streptavidina. Le piastre sono state lette in un lettore di piastre EnVision dopo incubazione notturna a temperatura ambiente. Negli studi di inibizione di composti, questo composto è stato testato su un intervallo di concentrazione da 25 M a 1,74 × 10⁻⁶ M in un formato a 16 punti, 3 volte. Il DMSO era a una concentrazione finale dello 0,5%. Questa sostanza chimica è stata preincubata con CRAF per 30 min prima di aggiungere i substrati per avviare la reazione. I dati di inibizione sono stati adattati a un'equazione logistica a quattro parametri per calcolare l'IC50 dei composti.
Saggio cellulare:^{^[2]}	Linee cellulari HCT116 cells Concentrazioni 0.1, 1, 10 μM Tempo di incubazione 1 hour Metodo BRAF/CRAF dimerization is assessed by immunoprecipitating BRAF or CRAF, followed by Western blot analysis of BRAF and CRAF. Levels of pMEK and pERK in whole-cell lysates (WCL) are determined by Western blot analysis. GAPDH level is included as a loading control.
Studio sugli animali:^{^[1]}	Modelli animali Calu-6 model (tumor bearing mice) Dosaggi 10, 30, or 200 mg/kg Somministrazione oral administration

Riferimenti

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28557458/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29343524/

Sellecks RAF709 È stato citato da 5 Pubblicazioni

A structure-based modelling approach identifies effective drug combinations for RAS-mutant acute myeloid leukemia [ bioRxiv, 2025, 2025.04.29.651188]	PubMed: 40654850
Tumour-selective activity of RAS-GTP inhibition in pancreatic cancer [ Nature, 2024, 629(8013):927-936]	PubMed: 38588697
Identification of a RAS-activating TMEM87A-RASGRF1 fusion in an exceptional responder to sunitinib with non-small cell lung cancer. [ Clin Cancer Res, 2020, 20 pii: clincanres]	PubMed: 32312893
KRASQ61H preferentially signals through MAPK in a RAF dimer-dependent manner in non-small cell lung cancer [ Cancer Res, 2020, canres.0448.2020]	PubMed: 32605999
Depolarization-Dependent C-Raf Signaling Promotes Hyperexcitability and Reduces Opioid Sensitivity of Isolated Nociceptors after Spinal Cord Injury [ J Neurosci, 2020, 40(34):6522-6535]	PubMed: 32690613

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