Pomalidomide (CC-4047)

Pomalidomide inibisce il rilascio di TNF-alpha stimolato da lipopolisaccaridi (LPS) nelle PBMC umane e nel sangue intero umano con valori IC50 di 13 nM e 25 nM, rispettivamente. [1] Questo composto inibisce la crescita delle cellule T regolatorie stimolate da IL-2 con un IC50 di ~1 μM. [2] Il trattamento con questo prodotto chimico (6,4 nM-10 μM) aumenta la produzione di IL-2 nelle cellule T del sangue periferico umano, ed è leggermente più potente nel sottogruppo CD4+ che nel sottogruppo CD8+. È significativamente più potente di CC-5013 nell'elevare i livelli di IL-2, IL-5 e IL-10, ma solo leggermente più potente di CC-5013 nell'elevare i livelli di IFN-γ. Questo agente migliora l'attività trascrizionale di AP-1 indotta dalle cellule SEE e Raji nelle cellule Jurkat in modo dose-dipendente, con un miglioramento massimo di 4 volte a 1 μM. [3] L'esposizione delle cellule Raji a varie concentrazioni di questo composto (2,5-40 μg/mL) per 48 ore porta a una significativa diminuzione della proliferazione cellulare e della sintesi del DNA. Si osserva una riduzione di circa il 40% rispetto ai controlli trattati con veicolo. [4]

Pomalidomide potenzia l'effetto antitumorale del rituximab contro i linfomi a cellule B in topi gravemente immunodeficienti combinati. La somministrazione di questo composto in combinazione con rituximab, conferisce ai topi un periodo di sopravvivenza mediano di 74 giorni rispetto ai 58 giorni del trattamento con CC5013/rituximab e ai 45 giorni della monoterapia con rituximab. L'effetto sinergico di questo composto e rituximab può essere completamente abrogato dalla deplezione delle cellule NK, supportando la proposta che l'espansione delle cellule NK sia un meccanismo attraverso il quale questo composto può aumentare l'attività antitumorale del rituximab. [4]

• Inibizione della sintesi di TNF-α

  L'attività inibitoria del TNF-α viene misurata in PBMC stimolati con lipopolisaccaride (LPS). Pomalidomide viene aggiunto ai PBMC umani 1 ora prima dell'aggiunta di LPS (1 μg/mL) e l'incubazione continua per altre 18-20 ore. I supernatanti vengono quindi raccolti e la concentrazione di TNF-α nei supernatanti viene determinata mediante ELISA. La concentrazione di questo composto che inibisce la produzione di TNF del 50% (IC50) viene calcolata mediante analisi di regressione non lineare. Il saggio di inibizione del TNF nel sangue intero umano viene eseguito in modo simile al saggio sui PBMC, tranne che il sangue intero umano fresco eparinizzato viene direttamente piastrato in piastre per microtitolazione.

• Linee cellulari

  Raji, SU-DHL-4 and SU-DHL-10 cell lines

• Concentrazioni

  Dissolved in DMSO, final concentrations 2.5-40 μg/mL

• Tempo di incubazione

  24 or 48 hours

• Metodo

  For assessment of cell apoptosis, Lymphoma cell lines are exposed to Pomalidomide (5 μg/mL) for 24 hours or 48 hours. The cells are stained with FITC-labeled Annexin V and propidium iodine. Cell apoptosis is analyzed by multicolor flow cytometric analysis using a fluorescence-activated cell sorter/FACStar Plus flow cytometer. Cells are scored as apoptotic if they are Annexin V–positive and propidium iodine–negative/positive (early and late apoptosis, respectively). For determination of cell proliferation, the Lymphoma cell lines are exposed to this compound (2.5, 5, 10, 20, and 40 μg/mL) for 24 hours or 48 hours. 1 μCi per well (96-well plate) of [³H]-thymidine is added and cells are incubated for another 18 hours. Cells are then harvested using the Harvest system into the 96-well glass filters and [³H]-thymidine uptake is measured using an automated scintillation counter.

• Modelli animali

  Disseminated lymphoma-bearing SCID mice

• Dosaggi

  0.5 mg/kg

• Somministrazione

  Injection i.p.