In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile. * Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto. * Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)
Preparazione delle soluzioni stock
Attività biologica
Descrizione
PI-1840 è un inibitore reversibile e selettivo della chimotripsina (CT-L) con una IC50 di 27 nM con scarsi effetti sulle altre due principali attività proteolitiche del Proteasome, tripsina (T-L) e idrolisi del peptide post-glutammilico (PGPH-L).
Target
Chymotrypsin-like proteasome
27 nM
In vitro
PI-1840 inibisce potentemente l'attività CT-L del Proteasome con IC50 di 0,37 μM in cellule tumorali umane intatte MDA-MB-468 e inibisce la proliferazione/sopravvivenza delle cellule umane MDA-MB-468. Nelle cellule tumorali intatte, questo composto inibisce l'attività CT-L, induce l'accumulo dei substrati del Proteasome p27, Bax e IκB-α, inibisce le vie di sopravvivenza e la vitalità e induce l'apoptosi.
In vivo
PI-1840 (150 mg/kg i.p.) inibisce la crescita tumorale nei topi con tumori mammari MDA-MB-231.
Nello screening ad alto rendimento, i peptidi fluorogenici vengono utilizzati come substrati per saggiare (a 10 μM) la libreria di 50.000 composti da ChemBridge per l'attività inibitoria contro l'attività proteolitica CT-L del Proteasome 20S di coniglio purificato. Per testare la selettività per CT-L rispetto a T-L e PGPH-L vengono utilizzati i peptidi fluorogenici corrispondenti. In breve, 1 nM di Proteasome 20S di coniglio purificato viene incubato con 20 μM di Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC per l'attività CT-L, Bz-Val-Gly-Arg-AMC per l'attività T-L e benzyloxycarbonyl Z-Leu-Leu-Glu-AMC per l'attività PGPH-L per 1 ora a 37 °C in 100 μL di tampone di saggio (50 mM Tris-HCl, pH 7,6) con o senza questo composto. Dopo l'incubazione, la produzione di gruppi 7-amido-4-metil-cumarina (AMC) idrolizzati viene misurata utilizzando un contatore multietichetta WALLAC Victor2 1420 con un filtro di eccitazione di 355 nm e un filtro di emissione di 460 nm. La quantità di AMC rilasciata rientra nell'intervallo lineare. Il Bortezomib viene utilizzato come controllo positivo per le determinazioni dell'IC50. Per determinare l'attività del Proteasome in cellule intere, vengono utilizzati estratti (5 μg) da lisato cellulare coltivato invece del Proteasome 20S di coniglio e si segue lo stesso saggio sopra menzionato.
Cells are plated in 96-well plates in 100 μL medium and allowed to attach overnight. Cells are then incubated for 120 h with varying concentrations of this compound. Media is aspirated and replaced with 100 μL complete media containing 1 mg/ml MTT and incubated for three hours at 37 °C in 5% CO2 humidified incubator. Media is then aspirated and DMSO is added. Cells are incubated for 10 min at room temperature while shaking, and the absorbance is determined at 540 nm using a μQuant spectrophotometric plate reader. The IC50 values are determined using equation under CT-L, T-L, PGPH-L proteolytic activity assays.
Prolonged unfolded protein reaction is involved in the induction of chronic myeloid leukemia cell death upon oprozomib treatment
[ Cancer Sci, 2020, 112(1):133-143]
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