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Descrizione biologica
| Specificità | Phospho-Tau (Ser262) Antibody [N15P23] rileva i livelli endogeni di proteina Tau totale solo quando è fosforilata in Ser262. |
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| Contesto | Phospho-Tau (Ser262) si riferisce alla proteina tau associata ai microtubuli fosforilata a serina 262 all'interno del suo dominio di ripetizione di legame ai microtubuli ricco di prolina (giunzione R1/R2), esistente come isoforma naturalmente non strutturata (varianti 0N, 1N, 2N) che contiene quattro ripetizioni di legame ai microtubuli (MTBRs) imperfette con motivi 275-VQIVYK283 KXGS; la fosforilazione a Ser262, spesso accompagnata da pSer356, interrompe l'epitopo KXGS innescato dalla chinasi MARK2/Par-1 e riduce drasticamente l'affinità di tau per la β-tubulina (spostamenti di Kd >10 volte) interferendo stericamente con il reticolo microtubulare. Innescato da oligomeri di amiloide-β che attivano MARK2 tramite clivaggio da calpaina o iperattivazione di CDK5/p25, questo evento di fosforilazione innesca una rapida depolimerizzazione dei microtubuli attraverso lo slegamento conformazionale, poiché pSer262 blocca l'ansa inter-ripetizione R1/R2 in uno stato disordinato, esponendo così siti di fosforilazione distali (Ser202/Thr205, Ser396/Ser404) per l'innesco da parte di GSK3β/Fyn. Questa fosforilazione sequenziale promuove l'oligomerizzazione della tau in semi prefibrillari 4R tossici capaci di propagazione trans-sinaptica tramite captazione neuronale ed esocitosi, causando al contempo la mislocalizzazione della tau dagli assoni ai compartimenti somatodendritici. Fisiologicamente, il ciclo transitorio di pSer262 tramite defosforilazione mediata da PP2A regola la dinamica dei microtubuli durante la plasticità neuronale, ma l'iperfosforilazione cronica, elevata nella malattia di Alzheimer (Braak I-II), precede la formazione dei grovigli neurofibrillari (NFT) di anni, stabilendo pSer262 come un biomarcatore “gatekeeper precoce” rilevabile nel liquido cerebrospinale (rapporto pTau262/tau) che media la sinaptotossicità di Aβ42, la perdita sinaptica e il declino cognitivo con specificità per i pre-grovigli granulari rispetto ai filamenti elicoidali appaiati (PHF) maturi. |
Informazioni sullutilizzo
| Applicazione | IHC, ELISA | Diluizione |
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| Reattività | Human | ||||
| Fonte | Mouse Monoclonal Antibody | MW | 33-79 kDa | ||
| Tampone di conservazione | PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 | Conservazione (Dalla data di ricevimento) |
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years | ||
| IHC |
Experimental Protocol：
Deparaffinization/Rehydration
1. Deparaffinize/hydrate sections:
2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.
3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.
4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.
5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.
6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.
Staining
1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.
2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.
3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.
4. Wash sections in wash buffer for 5 min.
5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.
6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.
7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.
8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.
9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.
10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.
11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.
12. Immerse slides in dH2O.
13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.
14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.
15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.
16. Mount sections with coverslips and mounting medium.
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Riferimenti
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