PF-543 hydrochloride

N. catalogoS7177 Lotto:S717702

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Dati tecnici

Formula

C27H32ClNO4S
Peso molecolare 502.07 Numero CAS 1706522-79-3
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (199.17 mM)
Ethanol 100 mg/mL (199.17 mM)
Water Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione PF-543 hydrochloride, un nuovo inibitore competitivo della sfingosina di SphK1, inibisce SphK1 con IC50 e Ki di 2,0 nM e 3,6 nM, e presenta una selettività >100 volte superiore rispetto all'isoforma SphK2. Questo composto induce apoptosi, necrosi e autofagia.
Target
SphK1
(Cell-free assay)		 SphK1
(Cell-free assay)
2.0 nM 3.6 nM(Ki)
In vitro

PF543 è un composto idrossimetilpirrolidinico permeabile alle cellule che inibisce la fosforilazione della sfingosina catalizzata da SphK-1/SphK1 in modo reversibile e competitivo con la sfingosina, non mostrando affinità per i recettori S1P e un'attività inibitoria molto ridotta contro Sphk2 (6,8% di inibizione a 10 μM) o altre 46 chinasi lipidiche e proteiche (IC50 >10 μM). Nelle cellule di carcinoma della testa e del collo 1483 con sovraespressione di SphK1, questo composto diminuisce il livello di S1P endogeno di 10 volte con un aumento proporzionale del livello di sfingosina. Si lega a SphK1 in modo reversibile (k off t1/2=8,5 min) e con alta affinità, e la costante di legame (Kd) è di 5 nM. Questa sostanza chimica non ha avuto alcun effetto sulla proliferazione e sulla sopravvivenza delle cellule 1483, A549, LN229, Jurkat, U937 e MCF-7, nonostante un drastico cambiamento nel rapporto S1P/sfingosina cellulare. È efficace come potente inibitore della formazione di S1P nel sangue intero, indicando che l'isoforma SphK1 della sfingosina chinasi è la principale fonte di S1P nel sangue umano.

In vivo PF-543 hydrochloride, un potente inibitore della sfingosina chinasi 1, ha ridotto l'ipertrofia disfunzionale, associata alla protezione contro l'apoptosi dei cardiomiociti.
Caratteristiche L'inibitore più potente di SphK1 descritto finora.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:

[1]
  • Quantificazione FITC-S1P/Saggio Caliper

    Viene sviluppato un formato a 384 pozzetti del saggio enzimatico SphK basato sulla separazione di FITC-S1P dal substrato di FITC-sfingosina non reagito utilizzando un sistema di spostamento della mobilità per elettroforesi capillare microfluidica. In breve, 3 nM di SphK1–His6 vengono incubati con 1 μM di FITC-sfingosina, 20 μM di ATP e 10 μM di questo composto (una concentrazione finale di DMSO del 2 %) in un tampone contenente 100 mM di Hepes (pH 7,4), 1 mM di MgCl2, 0,01 % di Triton X-100, 10 % di glicerolo, 100 μM di ortovanadato di sodio e 1 mM di DTT per 1 ora in una piastra Matrical MP-101-1-PP a 384 pozzetti. Le miscele di reazione (10 μL) vengono bloccate mediante l'aggiunta di 20 μL di 30 mM di EDTA e 0,15 % di reagente di rivestimento-3 in 100 mM di Hepes, e una piccola aliquota di ciascuna reazione (pochi nanolitri) viene analizzata nello strumento Caliper LabChip 3000 sotto una pressione di -1,5 psi (psi=6,9 kPa), una tensione a valle di -1900 V e un tempo di aspirazione di 0,2 s. Il prodotto fluorescente fosforilato e il substrato fluorescente non fosforilato sono apparsi come picchi distintivi e sono stati quantificati utilizzando i dati Caliper.
Saggio cellulare:

[1]
  • Linee cellulari

    1483, A549, LN229, Jurkat, U937, MCF-7

  • Concentrazioni

    ~1 μM

  • Tempo di incubazione

    7 days

  • Metodo

    CellTiter-Glo Assay
Studio sugli animali:

[2]
  • Modelli animali

    C57BL/6 mice

  • Dosaggi

    1 mg/kg

  • Somministrazione

    i.p.

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22397330/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/27063355/

Convalida del prodotto da parte del cliente

(C) Western blot analysis of mature TGF-β1, FN and Col-I protein levels in sham, sham+ PF-543, UUO and UUO +PF-543 groups at 7 days (n =3). (average ± SEM; ANOVA; *P < 0.05, **P < 0.01 versus sham group. #P < 0.05 versus UUO group). (D) Periodic acid-Schiff staning showed that tubular atrophy was evident in the obstructed kidneys at UUO 7 days after PF-543 treatment (n =6). (E) Masson

Dati da [ , , Int J Biochem Cell Biol, 2017, 90:17-28 ]

PF-543 is anti-proliferative and cytotoxic to CRC cells. Human CRC cell lines, including HCT-116 (a-d), DLD-1 and HT-29 (e), as well as patient-derived primary colon cancer cells (P1, P2 and P3, f), were incubated with regular or PF-543-containg medium for indicated time, cell proliferation was tested by viable cell counting assay (a) and colony formation assay (b); Cell survival was examined by MTT assay (c-f). Expression of SphK1 and Tubulin (the equal loading) was examined by Western blots (e and f, upper panels). Relative SphK1 expression (verse Tubulin) was quantified. “C” stands for untreated control cells (For all Figs). Values represented the mean ± SEM (n = 5). Experiments in this figure were repeated three times, with similar results achieved. *P < 0.05 versus “C” group.

Dati da [ , , Biochem Biophys Res Commun, 2016, 470(3):728-34. ]

Sellecks PF-543 hydrochloride È stato citato da 30 Pubblicazioni

SPHK1 enhances olaparib resistance in ovarian cancer through the NFκB/NRF2/ferroptosis pathway [ Cell Death Discov, 2025, 11(1):29] PubMed: 39875359
Elevated Sphingosine Levels Suppress Profibrotic TGF-β Signaling via the PKC/miR-21/SMAD7 Axis in Sphingosine Kinase 2-Deficient Renal Fibroblasts and Unilateral Ureteral Obstruction-Induced Kidney Fibrosis [ FASEB J, 2025, 39(12):e70768] PubMed: 40558859
Molecular subtyping of renal clear cell carcinoma based on prognostic RASSF family genes and validation of C1QL1 as a key prognostic marker [ Sci Rep, 2025, 15(1):9786] PubMed: 40118977
Targeting the SphK1/S1P/PFKFB3 axis suppresses hepatocellular carcinoma progression by disrupting glycolytic energy supply that drives tumor angiogenesis [ J Transl Med, 2024, 22(1):43] PubMed: 38200582
Cannabinoid-Induced Immunogenic Cell Death of Colorectal Cancer Cells Through De Novo Synthesis of Ceramide Is Partially Mediated by CB2 Receptor [ Cancers (Basel), 2024, 16(23)3973] PubMed: 39682160
Induction of Inflammation Disrupts the Negative Interplay between STING and S1P Axis That Is Observed during Physiological Conditions in the Lung [ Int J Mol Sci, 2023, 24(9)8303] PubMed: 37176007
Comprehensive metabolomics expands precision medicine for triple-negative breast cancer [ Cell Res, 2022, 10.1038/s41422-022-00614-0] PubMed: 35105939
Sphingosine kinase 1 promotes tumor immune evasion by regulating the MTA3-PD-L1 axis [ Cell Mol Immunol, 2022, 19(10):1153-1167] PubMed: 36050478
Targeting sphingosine kinase 1/2 by a novel dual inhibitor SKI-349 suppresses non-small cell lung cancer cell growth [ Cell Death Dis, 2022, 13(7):602] PubMed: 35831279
The anti-osteosarcoma cell activity by the sphingosine kinase 1 inhibitor SKI-V [ Cell Death Discov, 2022, 8(1):48] PubMed: 35115496

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