PF-3644022

PF-3644022 è un potente inibitore ATP-competitivo liberamente reversibile di MAPKAPK2 (MK2) con un Ki di 3 nM. Questo composto inibisce potentemente anche la produzione di TNFα con un IC50 di 160 nM.

PF-3644022 è un potente composto ATP-competitivo liberamente reversibile che inibisce l'attività della chinasi 2 attivata dalla proteina chinasi attivata da mitogeni (MK2) con buona selettività quando profilato contro 200 chinasi umane. Nella linea cellulare monocitica umana U937 o nelle cellule mononucleate del sangue periferico, questo composto inibisce potentemente la produzione di TNFα con attività simile. Blocca la produzione di TNFα e IL-6 nel sangue intero umano stimolato da LPS.^{<a class="sref" href="#s_ref">[1]</a>}

PF-3644022 mostra buoni parametri farmacocinetici nei ratti ed è efficace per via orale sia nel modello di TNFα indotto da LPS acuto nel ratto che nel modello di artrite cronica indotta dalla parete cellulare streptococcica, con valori di ED50 rispettivamente di 6,9 e 20 mg/kg.^{<a class="sref" href="#s_ref">[1]</a>}

• Saggi chinasici in vitro e cinetica di inibizione.

  L'attività chinasica di MK2 viene saggata utilizzando un peptide di proteina da shock termico 27 (HSP27) marcato fluorescentemente e un Caliper LabChip 3000. Il peptide fosforilato viene separato dal peptide substrato elettroforeticamente e quantificato. Tutte le reazioni chinasiche vengono eseguite a temperatura ambiente in 20 mM HEPES, contenente 10 mM MgCl2, 1 mM ditiotreitolo, 0,01% di albumina di siero bovino e 0,0005% di Tween 20, pH 7,5. Per gli esperimenti a punto finale, le reazioni vengono terminate durante la fase lineare con l'aggiunta di 30 mM EDTA. Gli esperimenti di selettività della chinasi vengono eseguiti con la concentrazione di MgATP fissata al Km(app) determinato per ciascun enzima. La velocità iniziale viene determinata in presenza e assenza di questo composto con ATP come substrato variabile mentre la concentrazione del peptide HSP27 viene mantenuta costante.

• Linee cellulari

  Human U937 monocytic cell line, hPBMCs

• Concentrazioni

  0.1 nM-100μM

• Tempo di incubazione

  1 h

• Metodo

  U937 cells and hPBMCs are pretreated with PF-3644022 at varying concentrations for 1 h before LPS stimulation at 100 ng/ml. TNFα levels in U937 cell are measured at 4 h after LPS stimulation by using an electrochemoluminescence MesoScale Discovery TNF kit. In hPBMCs, TNFα and IL-6, IL-8 are measured at 16 h after LPS stimulation by using a four-plex human cytokine MSD plate.

• Modelli animali

  LPS-induced acute endotoxemia inflammation model (adult male Lewis rats), chronic streptococcal cell wall-induced arthritis model (female Lewis rats)

• Dosaggi

  1 mg/kg

• Somministrazione

  Oral gavage