In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile. * Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto. * Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)
Preparazione delle soluzioni stock
Attività biologica
Descrizione
PF-06726304 è un inibitore selettivo di EZH2 con valori di Ki di 0,7 nM e 3 nM rispettivamente per WT EZH2 e Y641N; questo composto inibisce anche H3K27me3 con un valore di IC50 di 15 nM.
Target
Ezh2 (wild-type) (cell-free)
EZH2 Y641N (cell-free)
0.7 nM(Ki)
3 nM(Ki)
In vitro
PF-06726304 mostra un'inibizione biochimica di EZH2 molto potente, nonché una buona attività nella riduzione di H3K27Me3 nelle cellule e un effetto antiproliferativo.
In vivo
PF-06726304 mostra una robusta attività di crescita antitumorale in vivo e una derepressione dose-dipendente dei geni bersaglio di EZH2. Questo composto mostra una buona efficacia in un modello tumorale di linfoma a grandi cellule B diffuso Karpas-422 e ha esibito effetti farmacodinamici on-target in vivo.
Karpas-422 cells are plated in complete cell culture medium (100 μL/well) in a 96-well clear, V bottom polystyrene cell culture plate at a density of 2500 cells/well. The cells are then incubated for 2−3 h at 37 °C and 5% CO2. Compound dilution plates are prepared in 96-well clear, U-bottom polypropylene plates in 100% DMSO at 10 mM stock concentration in duplicate wells using an 11-point serial dilution (1:3 dilutions). This compound is further diluted in growth medium, and 25 μL is added to each well of the cell plates. The highest this chemical concentration tested is 50 μM final, with a 0.5% final DMSO concentration. The plates are then incubated for 72 h at 37 °C and 5% CO2. At the end of the incubation period with this compound, the plates are centrifuged at 2000 rpm for 5 min at room
temperature, and the medium is removed. Then 100 μL of acid-extracted solution is added to each well. The plates are shaken for 50 min at 4 °C to lyse the cells, and then 38 μL of neutralization buffer is added. The plates are then frozen at −80 °C. The next day, the plates are shaken at room temperature to thaw. Cell lysates (50 μL/well) are then transferred to ELISA plates. The plates are covered and incubated for 2.5 h at room temperature with constant slow-speed shaking. After incubation, the plates are washed seven times (300 μL/well) with 1× wash buffer. Then 100 μL of biotinylated trimethylhistone H3K27 detection antibody is added to each well and incubated for 2 h at room temperature with constant slow-speed shaking. After incubation, the plates are washed as described above. Horseradish peroxidase-linked antibody (100 μL) is added to each well and incubated for 60 min at room temperature with constant slow-speed shaking. After incubation, the plates are
washed. Finally, 100 μL of TMB substrate reagent is added to each well and incubated for 5 min at room temperature in the dark with slow shaking, after which 100 μL of stop solution is added to stop the reaction.
Sellecks PF-06726304 È stato citato da 3 Pubblicazioni
Genetic and epigenetic characterization of sarcoma stem cells across subtypes identifies EZH2 as a therapeutic target
[ NPJ Precis Oncol, 2025, 9(1):7]
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