PF-04691502

PF-04691502 inibisce potentemente la PI3K ricombinante di classe I e mTOR in saggi biochimici e sopprime la trasformazione di fibroblasti aviari mediata da PI3K γ, δ di tipo selvaggio o da PI3Kα mutante. Nelle linee cellulari tumorali mutate per PIK3CA e con PTEN deleto, questo composto riduce la fosforilazione di AKT T308 e AKT S473 (IC(50) di 7,5-47 nM e 3,8-20 nM, rispettivamente) e inibisce la proliferazione cellulare (IC(50) di 179-313 nM). Inibisce l'attività di mTORC1 nelle cellule, misurata da un saggio stimolato dai nutrienti indipendente da PI3K, con un IC(50) di 32 nM e inibisce l'attivazione degli effettori a valle di PI3K e mTOR, inclusi AKT, FKHRL1, PRAS40, p70S6K, 4EBP1 e S6RP. L'esposizione a breve termine a questa sostanza chimica inibisce prevalentemente PI3K, mentre l'inibizione di mTOR persiste per 24-48 ore. Questo composto induce un arresto del ciclo cellulare in G(1), concomitante con l'upregulation di p27 Kip1 e la riduzione di Rb. [1]

L'attività antitumorale di PF-04691502 è osservata in xenotrapianti di U87 (PTEN nullo), SKOV3 (mutazione PIK3CA) e carcinoma polmonare non a piccole cellule. [1] Questo composto inibisce la crescita tumorale a 7 giorni del 72%. L'imaging FDG-PET ha rivelato che riduce drasticamente il metabolismo del glucosio. I biomarcatori tissutali dell'attività del pathway PI3K/mTOR, p-AKT (S473) e p-RPS6 (S240/244), sono anche drasticamente inibiti dopo il suo trattamento. [2]

• Saggio chinasi

  Il saggio di polarizzazione della fluorescenza per l'inibizione competitiva dell'ATP viene eseguito come segue: la soluzione di diluizione di mPI3Kα (90 nM) viene preparata in tampone di saggio fresco (50 mM Hepes pH 7.4, 150 mM NaCl, 5 mM DTT, 0.05% CHAPS) e mantenuta su ghiaccio. La reazione enzimatica contiene 0,5 nM di PI3Kα di topo (complesso p110α/p85α purificato da cellule di insetto), 30 μM di PIP2, PF-04691502 (0, 1, 4 e 8 nM), 5 mM di MgCl₂ e diluizioni seriali 2 volte di ATP (0–800 μM). Il dimetilsolfossido finale è del 2,5%. La reazione viene avviata con l'aggiunta di ATP e terminata dopo 30 minuti con 10 mM di EDTA. In una piastra di rilevamento, 15 µL di miscela rilevatore/sonda contenente 480 nM di dominio GST-Grp1PH e 12 nM di PIP3 fluorescente marcato con TAMRA in tampone di saggio vengono miscelati con 15 µL di miscela di reazione chinasica. La piastra viene agitata per 3 minuti e incubata per 35-40 minuti prima della lettura su un LJL Analyst HT.

• Linee cellulari

  BT20, U87MG, and SKOV3 cells

• Concentrazioni

  0-3 mM

• Tempo di incubazione

  3 days

• Metodo

  BT20, U87MG, and SKOV3 cells are plated at 3,000 cell/well in 96-well culture plates in growth medium with 10% FBS. Cells are incubated overnight and treated with DMSO (0.1% final) or serial diluted this compound for 3 days. Resazurin is added to 0.1 mg/mL. Plates are incubated at 37 °C in 5% CO₂ for 3 hours. Fluorescence signals are read as emission at 590 nm after excitation at 530 nm. IC50 values are calculated by plotting fluorescence intensity to drug concentration in nonlinear curve

• Modelli animali

  LSL-Kras^G12D heterozygous mice (B6.129-Kras ^tm4Tyj) and Pten^del mice (c;129S4-Pten ^tm1Hwu/J), Orthotopic transplant of ovarian tumors

• Dosaggi

  daily at either 7.5 or 10 mg/kg

• Somministrazione

  Administered via oral gavage