MLN4924 (Pevonedistat)

N. catalogoS7109 Lotto:S710905

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Dati tecnici

Formula

C21H25N5O4S
Peso molecolare 443.52 Numero CAS 905579-51-3
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 89 mg/mL (200.66 mM)
Ethanol 89 mg/mL (200.66 mM)
Water Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione MLN4924 è un inibitore a piccola molecola dell'enzima attivante Nedd8 (NAE) con IC50 di 4 nM.
Target
NAE
(Cell-free assay)
4 nM
In vitro Pevonedistat (MLN4924) è strutturalmente correlato all'adenosina 59-monofosfato (AMP) – un prodotto di legame stretto della reazione NAE. Esso (3 μM) inibisce selettivamente la NAE nei lisati cellulari HCT-116 e inibisce il ricambio proteico complessivo di <9% nelle cellule HCT-116. Questo composto provoca una diminuzione dose-dipendente del tioestere Ubc12–NEDD8 e dei coniugati NEDD8–cullin con una IC50 < 0,1 μM nelle cellule HCT-116, con conseguente aumento reciproco dell'abbondanza dei noti substrati CRL CDT1, p27 e NRF2, ma non dei substrati non-CRL. Esso (3 μM) porta le cellule ad accumularsi in fase S già dopo 8 ore e provoca una frazione significativa di cellule contenente DNA 4N entro 24 ore nelle cellule HCT-116. Alla stessa concentrazione, provoca un rapido accumulo di pIkappaBalpha, una diminuzione del contenuto nucleare di p65, una riduzione dell'attività trascrizionale del fattore nucleare-kappaB (NF-kappaB) e un arresto in G(1), portando infine all'induzione dell'apoptosi, eventi coerenti con la potente inibizione del pathway NF-kappaB nelle cellule ABC DLBCL. A 1 μM, innesca la replicazione del DNA e inibisce la proliferazione cellulare stabilizzando il fattore di replicazione del DNA Cdt1, un substrato delle culline 1 e 4. Questa concentrazione, sufficiente a elevare Cdt1 per 4-5 ore, è ritenuta sufficiente per indurre la replicazione del DNA e per attivare i pathway di apoptosi e senescenza. Il trattamento con questo composto induce le caratteristiche dei fenotipi di senescenza come evidenziato dalla morfologia cellulare ingrandita e appiattita e dalla colorazione positiva della β-Gal associata alla senescenza. La senescenza indotta da MLN4924 è associata alla risposta cellulare al danno al DNA, innescata dall'accumulo delle proteine di licenza del DNA CDT1 e ORC1, come risultato dell'inattivazione delle CRL/SCF E3s. È irreversibile e accoppiata con l'accumulo persistente di p21 e l'attivazione sostenuta della risposta al danno al DNA.
In vivo Pevonedistat (MLN4924) (60 mg/kg) provoca una diminuzione dose- e tempo-dipendente dei livelli di NEDD8–cullin già 30 minuti dopo la somministrazione in topi portatori di tumore HCT-116, con un effetto massimo 1–2 ore post-dose. Porta anche a un aumento dose- e tempo-dipendente dei livelli di stato stazionario di NRF2 e CDT1 in topi portatori di tumore HCT-116. Questo composto porta a danni al DNA nel tumore indicati dai maggiori livelli di CHK1 fosforilato in topi portatori di tumore HCT-116. Quando somministrato con un programma BID a 30 mg/kg e 60 mg/kg, inibisce la crescita tumorale con valori T/C di 0,36 e 0,15, rispettivamente, in topi portatori di xenotrapianti HCT-116. Esso (60 mg/kg) blocca i biomarcatori del pathway NAE e provoca una completa inibizione della crescita tumorale in topi portatori di tumori xenotrapiantati umani di ABC- e GCB-DLBCL. Questo composto (60 mg/kg) provoca l'inibizione del pathway NF-kappaB accompagnata da regressioni tumorali in modelli murini di tumori umani primari di ABC-DLBCL.
Caratteristiche Un inibitore di NAE basato sul meccanismo, che crea un addotto covalente NEDD8-MLN4924 catalizzato dall'enzima.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:[1]
  • Saggi enzimatici in vitro di E1 Activating

    Un formato di saggio di trasferimento di energia di fluorescenza risolto nel tempo viene utilizzato per misurare l'attività in vitro di NAE. La reazione enzimatica, contenente 50 μL di 50 mM HEPES, pH 7,5, 0,05% BSA, 5 mM MgCl2, 20 μM ATP, 250 μM glutatione, 10 nM Ubc12–GST, 75 nM NEDD8–Flag e 0,3 nM di enzima NAE umano ricombinante, viene incubata a 24 ℃ per 90 min in una piastra a 384 pozzetti, prima della terminazione con 25 μL di tampone di arresto/rilevamento (0,1 M HEPES, pH 7,5, 0,05% Tween20, 20 mM EDTA, 410 mM KF, 0,53 nM di anticorpo monoclonale specifico anti-Flag-M2 marcato con Europium-Cryptate e 8,125 μg/mL di anticorpo specifico anti-GST marcato con alloficocianina PHYCOLINK (XL-APC)). Dopo incubazione per 2 ore a 24 ℃, la piastra viene letta sullo strumento LJL Analyst HT Multi-Mode utilizzando un metodo di fluorescenza risolta nel tempo. Un protocollo di saggio simile viene utilizzato per misurare altri enzimi E1.
Saggio cellulare:[1]
  • Linee cellulari

    HCT-116 cells

  • Concentrazioni

    3 μM

  • Tempo di incubazione

    72 hours

  • Metodo

    Cell suspensions are seeded at 3,000–8,000 cells per well in 96-well culture plates and incubated overnight at 37 ℃. Pevonedistat (MLN4924) is then added to the cells in complete growth media and incubated for 72  hours at 37 ℃. Cell number is quantified using the ATPlite assay.
Studio sugli animali:[1]
  • Modelli animali

    mice bearing HCT-116 xenografts

  • Dosaggi

    60 mg/kg

  • Somministrazione

    Subcutaneously injection

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19360080/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20525923/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21159650/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21677879/

Convalida del prodotto da parte del cliente

Immunoblot analysis of IKZF1/3 and CRBN levels in MM.1S cells treated with Poma (P, 10 nM) for 16 h, after incubating with MLN4924 (M, 0.2 μM) or DMSO for 48 h

Dati da [ , , Leukemia, 2019, 33(1):171-180 ]

BEL7402 or HepG2 cells were transfected with GFP-tagged Hakai and treated with 0.5% DMSO, 10 μM MG132 and 5 μM MLN4924 (c). Endogenous Ajuba levels were determined by immunoblotting using anti-Ajuba antibody. GAPDH was used as a loading control. Densitometry was performed for quantification, and the ratios of Ajuba and GAPDH are presented.

Dati da [ , , J Exp Clin Cancer Res, 2018, 37(1):165 ]

(A) Mouse peritoneal macrophages were pretreated with DMSO or MLN4924 for 2 h and then stimulated with LPS or poly(I:C) for the indicated time period. Phosphorylated and total signaling proteins were examined by Western blot analysis.

Dati da [ , , J Immunol, 2016, 196(7):3117-23 ]

Sellecks MLN4924 (Pevonedistat) È stato citato da 153 Pubblicazioni

Multigenerational cell tracking of DNA replication and heritable DNA damage [ Nature, 2025, 642(8068):785-795] PubMed: 40399682
USP7 V517F mutation as a mechanism of inhibitor resistance [ Nat Commun, 2025, 16(1):2526] PubMed: 40087304
SAMD9 senses cytosolic double-stranded nucleic acids in epithelial and mesenchymal cells to induce antiviral immunity [ Nat Commun, 2025, 16(1):3756] PubMed: 40263291
The E3 ligase RNF32 controls the IκB kinase complex and NF-κB signaling in intestinal stem cells [ Mol Cell, 2025, 85(22):4254-4267.e9] PubMed: 41167191
LC3-dependent intercellular transfer of phosphorylated STAT1/2 elicits CXCL9+ macrophages and enhances radiation-induced antitumor immunity [ J Clin Invest, 2025, 135(23)e195279] PubMed: 41321309
Disrupting AGR2/IGF1 paracrine and reciprocal signaling for pancreatic cancer therapy [ Cell Rep Med, 2025, 6(2):101927] PubMed: 39914384
Functional landscape of ubiquitin linkages couples K29-linked ubiquitylation to epigenome integrity [ EMBO J, 2025, 10.1038/s44318-025-00599-7] PubMed: 41125851
Identification of a BACH1 lung cancer signature: A novel tool for understanding BACH1 biology and identifying new inhibitors [ Redox Biol, 2025, 85:103789] PubMed: 40716152
A genome-wide, CRISPR-based screen reveals new requirements for translation initiation and ubiquitination in driving adipogenic fate change [ Genes Dev, 2025, 10.1101/gad.352779.125] PubMed: 40675820
DTL dose-dependent control of sex-dimorphic ferroptosis in liver ischemia reperfusion injury [ Cell Rep, 2025, 44(7):115920] PubMed: 40560731

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