In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO
40%PEG300
5%Tween80
50%ddH2O
Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.
2.500mg/ml
(4.88mM)
Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 50 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution
5% DMSO
95% Corn oil
Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.
0.500mg/ml
(0.98mM)
Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 10 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile. * Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto. * Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)
Preparazione delle soluzioni stock
Attività biologica
Descrizione
PD0166285 è un potente inibitore di Wee1 e Chk1 con attività a concentrazioni nanomolari (IC50=24 nM per Wee1 e 72 nM per Myt1). Questo composto è anche un nuovo abrogatore del checkpoint G2. Induce l'apoptosi.
Target
Wee1 (Cell-free assay)
Myt1 (Cell-free assay)
Chk1 (Cell-free assay)
24 nM
72 nM
3.4 μM
In vitro
PD0166285 è stato identificato per inibire l'attività di Wee1 a concentrazioni nanomolari. L'inibitore abroga il checkpoint G2/M inducendo una divisione cellulare precoce. A livello cellulare, 0,5 μM di questo composto inibisce drasticamente la fosforilazione di Cdc2 indotta da irradiazione a livello di Tyr-15 e Thr-14 in sette delle sette linee cellulari tumorali testate. Questa abrogazione del checkpoint G2 da parte di questa sostanza chimica è dimostrata per uccidere le cellule tumorali. Non inibisce Cdc2/ciclina B ma inibisce la chinasi Chk1 a una concentrazione molto più alta (3433 nM). Il trattamento delle cellule con l'inibitore è correlato alla stabilizzazione dei microtubuli e alla diminuzione della trascrizione della ciclina D. Pertanto, questo composto potrebbe essere una terapia anti-cancro potenzialmente utile.
In vivo
PD0166285 a una concentrazione di 0,5 μM può inibire la fosforilazione di Cdc2Y15/T14 in tutte le linee cellulari testate, indipendentemente dal loro stato p53 e il targeting farmacologico di WEE1 da parte di questo composto sensibilizza i tumori U251-FM GBM all'IR in vivo.
Lo screening di massa di Wee1 viene eseguito utilizzando il kit SPA della chinasi p34cdc2 di Amersham con alcune modifiche. Brevemente, 45–60 nM di chinasi Wee1 a lunghezza intera viene incubata con 25 μM di questo composto, 20 μM di ATP e 122–441 nM di Cdc2/ciclina B in un volume finale di 50 μl di tampone di diluizione enzimatica [50 mM Tris (pH 8,0), 10 mM NaCl, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT e 0,1 mM Na3VO4]. Dopo 30 minuti di incubazione a 30°C, 30 μl di tampone chinasico contenente [33P]ATP [67 mM Tris (pH 8,0), 40 mM NaCl, 13 mM MgCl2, 1 mM DTT e 0,13 mM Na3VO4] contenente 1 μM di peptide biotinilato e 0,25 μCi di [γ-33P]ATP vengono aggiunti alla reazione e incubati per altri 30 minuti a 30°C. La reazione viene interrotta aggiungendo 200 μl di tampone di arresto [50 μM ATP, 5 mM EDTA, 0,1% Triton X-100 e 1,25 mg/ml di perline SPA in PBS]. Dopo centrifugazione a 2400 rpm per 15 minuti, la piastra viene contata con il contatore Microbeta di Wallac.
B16 cells (1 × 105 cells in 100 mm-dishes) are maintained in medium overnight. In addition, the cells are treated with (0, 0.5, 1.0, or 2.0 μM) PD0166285 (including DMSO vehicle) for indicated times. The cells are washed twice with phosphate-buffered saline (PBS). Next, the cells are trypsinized, so the cell numbers in each dish are determined by using a computed cell-counter (Sysmex CDA-500) according to manufacturer's recommendation.
Synergistic induction of mitotic pyroptosis and tumor remission by inhibiting proteasome and WEE family kinases
[ Signal Transduct Target Ther, 2024, 9(1):181.]
Comprehensive multi-omics analysis reveals WEE1 as a synergistic lethal target with hyperthermia through CDK1 super-activation
[ Nat Commun, 2024, 15(1):2089]
Mild replication stress causes premature centriole disengagement via a sub-critical Plk1 activity under the control of ATR-Chk1
[ Nat Commun, 2023, 14(1):6088]
Prolonged unfolded protein reaction is involved in the induction of chronic myeloid leukemia cell death upon oprozomib treatment
[ Cancer Sci, 2020, 112(1):133-143]
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