PCI-34051

PCI-34051 possiede una promettente potenza per HDAC8 con un K_i di 10 nM. Questo composto ha un'elevata selettività (circa cinque volte) per HDAC8 rispetto alle altre HDAC di classe I, inclusa HDAC1. Rivela una selettività maggiore di 200 volte rispetto a HDAC1 e HDAC6, e maggiore di 1000 volte rispetto a HDAC2, HDAC3 e HDAC10. Questa sostanza chimica inibisce la linea tumorale ovarica OVCAR-3 con un GI50 di 6 μM e il 15% di morte cellulare. Non si osserva alcuna acetilazione significativa della tubulina né degli istoni nelle linee cellulari sensibili trattate con questo composto a concentrazioni inferiori a 25 μM a 24 ore né a tempi precedenti. Induce un effetto citotossico selettivo in linee cellulari derivate solo da neoplasie maligne delle cellule T. Questo composto induce apoptosi caspasi-dipendente. Quando l'attività della caspasi-3 viene misurata a vari tempi dopo il trattamento con 5 μM di questa sostanza chimica, si osservano livelli crescenti di attività da 12 a 24 a 48 ore, un altro segno distintivo dell'apoptosi, coerente con i livelli più elevati di attività della caspasi a questo punto temporale. Non stimola il clivaggio di Bid, un effetto caratteristico della via apoptotica estrinseca. Mentre P116 e J.RT3-T.5 sono sensibili a questo composto, la linea J.gamma1 deficiente in PLCγ1 rivela una marcata diminuzione dell'estensione della sua apoptosi indotta. Inoltre, i livelli di calcio allo stato stazionario influenzano fortemente l'apoptosi indotta da questa sostanza chimica. Induce il rilascio del citocromo c dai mitocondri.[1]

PCI-34051 è un potente e specifico inibitore di HDAC8.

• Attività istone deacetilasica

  Per la caratterizzazione di PCI-34051, le misurazioni vengono eseguite in un volume di reazione di 100 μL utilizzando piastre di saggio a 96 pozzetti in un lettore di piastre a fluorescenza. Per ogni isoenzima. La proteina HDAC nel tampone di reazione (50 mM HEPES, 100 mM KCl, 0,001% Tween-20, 5% dimetil solfossido, pH 7,4, supplementato con albumina sierica bovina a concentrazioni di 0-0,05%) viene miscelata con questo composto a varie concentrazioni e lasciata incubare per 15 min. La tripsina viene aggiunta a una concentrazione finale di 50 nM, e l'acetil-glicil-Ala-(N-acetil-Lis)-amino-4-metilcumarina viene aggiunta a una concentrazione finale di 25-100 μM per avviare la reazione. Dopo un tempo di latenza di 30 min, la fluorescenza viene misurata su un intervallo di tempo di 30 min utilizzando una lunghezza d'onda di eccitazione di 335 nm e una lunghezza d'onda di rilevamento di 460 nm. L'aumento della fluorescenza nel tempo viene utilizzato come misura della velocità di reazione.

• Linee cellulari

  A549 cell line, Ovcar-3 cell line

• Concentrazioni

  5 μM

• Tempo di incubazione

  24 hours

• Metodo

  Tumor cell lines and human umbilical vein endothelial cells are cultured for at least two doubling times, and growth is monitored at the end of PCI-34051 exposure using an Alamar Blue fluorometric cell proliferation assay as recommended by the manufacturer. This compound is assayed in triplicate wells in 96-well plates. The concentration required to inhibit cell growth by 50% (GI50) and 95% confidence intervals are estimated from nonlinear regression using a four-parameter logistic equation.

• Modelli animali

  Male C57BL/6 and BALB/c mice

• Dosaggi

  40 mg/kg

• Somministrazione

  i.p.