P22077

P22077 è un analogo dell'inibitore di USP7 P5091, recentemente scoperto. Questo composto ha un'attività trascurabile verso DEN1 e SENP2core nell'intervallo di concentrazione testato, ma inibisce USP7 con un IC50 di 8 μM. [1]

Le attività inibitorie di questa sostanza chimica in vitro contro un panel di DUB, cisteina proteasi e altre famiglie di enzimi proteolitici dimostrano che inibisce USP7 e la DUB USP47 strettamente correlata. Inibisce un sottoinsieme più piccolo di DUB a una concentrazione di 15–45 mM nei lisati cellulari. Questo composto induce la morte delle cellule (tumorali) con valori di EC50 nell'intervallo micromolare basso. La sua inibizione ha mostrato cambiamenti nei livelli di proteine ubiquitinate che sono distinti dall'inibitore a specificità ampia. Inoltre, la MS quantitativa suggerisce che i componenti della E3 Ubiquitin ligasi RBX1, DCAF7, DCAF11 e la proteina legante i danni al DNA 1 (DDB1) sono ridotti in seguito al trattamento cellulare con questa sostanza chimica. [2]

L'inibizione di USP7 da parte di P22077 inibisce anche la crescita dei tumori di melanoma in vivo.

• Saggi UbL-EKL

  Salvo diversa indicazione, l'isopeptidasi ricombinante viene miscelata con UbL-EKL e EKLsubstrate I a concentrazioni finali di 20, 50 e 20 nM, rispettivamente, in un volume totale di 100 μL in un pozzetto di una piastra a 96 pozzetti con pareti nere. Tutte le diluizioni vengono eseguite in tampone di saggio isopeptidasi (20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM CaCl₂ e 2 mM β-mercaptoetanolo). L'aumento dell'intensità di fluorescenza nel tempo viene determinato su un lettore di piastre a fluorescenza Perkin Elmer Envision con filtri di eccitazione ed emissione corrispondenti al peptide di trasferimento di energia per risonanza di fluorescenza utilizzato. Salvo diversa indicazione, le unità di fluorescenza relative nette (RFU) vengono determinate sottraendo il valore di RFU del bianco (20 nM EKL substrate I o 100 nM EKL substrate II in tampone di saggio isopeptidasi) da ogni punto dati. Gli esperimenti di sensibilità SENP2core, SUMO3-EKL vengono eseguiti miscelando 0–100 fM di SENP2core con 50 nM di SUMO3-EKL e 100 nM di EKL substrate I in un volume totale di 100 μL come sopra.

• Modelli animali

  Female SD nude mice

• Dosaggi

  10 mg/kg

• Somministrazione

  i.v.