In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile. * Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto. * Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)
Preparazione delle soluzioni stock
Attività biologica
Descrizione
NVP-BVU972 è un inibitore selettivo e potente di Met (c-Met) con una IC50 di 14 nM.
Target
Met
14 nM
In vitro
NVP-BVU972 inibisce potentemente la chinasi MET ma mostra una bassa inibizione contro altre chinasi, inclusa la chinasi RON più strettamente correlata, con valori di IC50 superiori a 1000 nM. Questo composto sopprime anche la fosforilazione costitutiva di MET nelle cellule GTL-16 o la fosforilazione di MET stimolata da HGF nelle cellule A549 con valori di IC50 di 7,3 nM e 22 nM, rispettivamente. Previene potentemente la crescita delle linee cellulari GTL-16, MKN-45 ed EBC-1 amplificate dal gene MET con valori di IC50 di 66 nM, 82 nM e 32 nM, rispettivamente. In linea con la loro alta frequenza in questo screening di composti, le mutazioni Y1230 e D1228 danno luogo a spostamenti drammatici nei valori di IC50 misurati per esso nella linea cellulare BaF3. La resistenza innescata da V1155L è più limitata a questa sostanza chimica. Una riduzione dose-dipendente della fosforilazione di TPR-MET quando applicata a cellule BaF3 che esprimono TPR-MET wild-type. Sia le mutazioni Y1230H che D1228A hanno abrogato l'effetto di questo composto ma non di AMG 458. Tuttavia, F1200I e L1195V interferiscono con la sua potenza nel prevenire la fosforilazione di TPR-MET.
Saggio biochimico TR-FRET con MET wild type e mutanti
L'attività enzimatica viene misurata in un saggio di trasferimento di energia per risonanza di fluorescenza risolto nel tempo (TR-FRET), rilevando la fosforilazione della tirosina con un anticorpo anti-fosfo-tirosina marcato con Eu (donatore di fluorescenza) e alloficocianina coniugata a streptavidina (accettore di fluorescenza) che si lega a una biotina sul peptide substrato. Per ogni variante, le concentrazioni di Km per ATP vengono determinate in assenza di questo composto, e la concentrazione di ATP nella reazione chinasica viene impostata a Km (4 μM per MET wt, 1 μM per MET Y1230H e MET F1200I). Viene disciolto e diluito in DMSO e saggiato in quadruplicato. Le reazioni chinasiche vengono eseguite in 50 mM Tris-HCl pH 7,5, 8 mM MgCl2, 4 mM MnCl2, 0,05% Tween 20, 0,05% albumina sierica bovina, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,1 mM Na3VO4, in piastre bianche da 1536 pozzetti a temperatura ambiente. Questo composto chimico e l'enzima vengono incubati in un volume di 2 μL per 20 min, seguiti dall'aggiunta di 1 μL di ATP e 1 μL di peptide substrato biotinilato (PTK1) a concentrazioni finali rispettivamente di Km e 1 μM. Le concentrazioni enzimatiche nelle reazioni sono 5 nM per MET wt e 4 nM per le varianti F1200I e Y1230H. Dopo 90 min, le reazioni vengono interrotte con l'aggiunta di 1 μL di soluzione di stop/rilevazione per raggiungere concentrazioni finali di 10 mM EDTA, 3,5 nM di anticorpo anti-fosfo-tirosina marcato con Eu PY20 e 10 nM di streptavidina alloficocianina. Il trasferimento di energia per risonanza di fluorescenza risolto nel tempo viene misurato in un lettore di piastre Envision (eccitazione 320 nm, emissione 615 nm e 665 nm).
BaF3 cells containing TPR-MET or various mutants thereof are grown in RPMI 1640 medium containing 10% fetal calf serum. For maintenance of parental BaF3 cells the medium is additionally supplemented with 10 ng/mL interleukin-3 (IL-3). For proliferation assays, BaF3 cells are seeded on 96-well-plates in triplicates at 104 cells per well and incubated with various concentrations of this compound for 72 hours followed by quantification of viable cells using a resazurin sodium salt dye reduction readout. IC50 values are determined with the XLFit Excel Add-In using a 4-parameter dose response model.
Riferimenti
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21697284/
Sellecks NVP-BVU972 È stato citato da 1 Pubblicazione
A chemical screen for modulators of mRNA translation identifies a distinct mechanism of toxicity for sphingosine kinase inhibitors
[ PLoS Biol, 2021, 19(5):e3001263]
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