BGT226 (NVP-BGT226) maleate

Gli effetti antiproliferativi e pro-apoptotici di NVP-BGT226 sono indipendenti dallo stato bcr-abl. L'attivazione della cascata di segnale AKT/mTOR è soppressa da NVP-BGT226 in modo dipendente dalla concentrazione e dal tempo. L'analisi citofluorimetrica mostra un accumulo di cellule nella fase G(0)-G(1) con una concomitante perdita nella fase S. NVP-BGT226 mostra una potente attività inibitoria della crescita contro tutte le linee cellulari testate, incluse le linee cellulari SCC4, TU183 e KB, con un IC50 che varia da 7,4 a 30,1 nM. In particolare, sia le cellule Detroit 562 che le HONE-1, che esprimono la mutazione PIK3CA H1047R, sono ancora sensibili all'effetto inibitorio della crescita del trattamento con NVP-BGT226. Inoltre, la sensibilità a NVP-BGT226 tra le cellule HONE-1. I risultati del saggio TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling) e l'analisi di caspasi 3/7 e PARP indicano che NVP-BGT226 induce la morte delle cellule tumorali attraverso una via indipendente dall'apoptosi. NVP-BGT226 induce l'autofagia come indicato dall'aggregazione e dalla sovraregolazione della proteina della catena leggera 3B-II associata ai microtubuli e dalla degradazione di p62. Il silenziamento genico di Beclin1 o il co-trattamento dell'inibitore dell'autofagosoma, 3-metiladenina, inibisce l'autofagia indotta da NVP-BGT226 e porta al recupero della sopravvivenza delle colonie.[2] NVP-BGT226 inibisce la crescita nelle comuni linee cellulari di mieloma e nelle cellule di mieloma primarie (come le linee cellulari NCI-H929, U266, RPMI-8226 e OPM2 MM) a concentrazioni nanomolari in modo tempo-dipendente e dose-dipendente. NVP-BGT226 inibisce la fosforilazione della proteina chinasi B (Akt), P70S6k e 4E-BP-1 in modo tempo-dipendente e dose-dipendente. L'effetto stimolatorio del fattore di crescita insulino-simile 1, dell'interleuchina-6 e del mezzo condizionato delle cellule stromali HS-5 sulla crescita delle cellule di mieloma è completamente abrogato da NVP-BGT226. L'inibizione della fosfoinositolo-3-chinasi/mammalian target of rapamycin da parte di NVP-BGT226 è altamente efficace e NVP-BGT226 rappresenta un potenziale nuovo candidato per la terapia mirata nel mieloma multiplo. L'inibizione combinata di PI3K e mammalian target of rapamycin (mTOR) da parte di NVP-BGT226 si è dimostrata molto efficace in termini di induzione dell'apoptosi e inibizione della proliferazione. [3] In un altro studio, dopo 24 ore, l'86,9% delle cellule MiaPaCa-2 trattate con 100 nM di NVP-BGT226 si arresta nella fase G0/G1 rispetto al 55,6% delle cellule di controllo. [4]

In un modello animale xenotrapiantato, NVP-BGT226 ritarda significativamente la crescita tumorale in modo dose-dipendente, insieme a una soppressione dell'espressione citoplasmatica della p-p70 S6 chinasi e alla presenza di formazione di autofagosomi. NVP-BGT226 inibisce la crescita tumorale in modo dose-dipendente in un modello murino xenotrapiantato con cellule FaDu. La somministrazione orale di NVP-BGT226 a 2,5 e 5 mg/kg per 3 settimane provoca una riduzione del 34,7% e del 76,1% della crescita tumorale al giorno 21, rispettivamente (rispetto al controllo). NVP-BGT226 mostra un'inibizione comparabile contro la crescita tumorale alla rapamicina. Il volume finale di entrambi i gruppi è significativamente inferiore a quelli trattati con LY294002 (un inibitore di PI3K) o il controllo. [2]

• Linee cellulari

  NCI-H929, U266, RPMI-8226 and OPM2 MM cells

• Concentrazioni

  20-250 nM

• Tempo di incubazione

  36 hours

• Metodo

  NCI-H929, U266, RPMI-8226 and OPM2 MM cells are seeded in 96-well plates at a concentration of 1.5 × 10⁴ cells/well in RPMI medium supplemented with 10% fetal bovine serum with or without NVP-BGT226 that is to be tested. After 36 hours, BrdU-labelling solution is added (final concentration: 10 μM), and cells are cultured for another 12 hours in a humidified atmosphere (37 °C/5% CO₂). Then, the plates are centrifuged (10 min, 300 g), and the supernatants are discarded. The plates are dried at 60 °C for 2 hours. After fixation with ethanol/HCl for 30 min at -20 °C, the DNA is partially digested by nuclease treatment for 30 min at 37 °C. The cells are washed three times with medium and incubated with anti-BrdU-POD labelling solution for 30 min at 37 °C. The anti-POD solution is removed and the cells are washed three times with washing buffer. The ABTS substrate solution is added, and absorbance is measured in a microplate reader at 405 nm with a reference wave length of 490 nm.

• Modelli animali

  Human FaDu xenografted mice

• Dosaggi

  5 mg/kg for 3 weeks

• Somministrazione

  Oral administration