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Descrizione biologica
| Specificità | Nurr1 Antibody [L9M11] rileva i livelli endogeni della proteina Nurr1 totale. |
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| Contesto | Nurr1 (NR4A2), un fattore di trascrizione recettore nucleare orfano indispensabile per la specificazione, la sopravvivenza e il mantenimento dei neuroni dopaminergici del mesencefalo, presenta un'architettura modulare che comprende un dominio di transattivazione A/B N-terminale (AF-1) con siti di fosforilazione (Ser336 da ERK), un dominio di legame al DNA centrale (DBD) dotato di due motivi a dito di zinco che riconoscono gli elementi di risposta NGFI-B (NBRE: AAAGGTCA) come monomeri o semisedi IR0 negli eterodimeri RXR, una regione cerniera flessibile che facilita il reclutamento di cofattori, e un dominio di legame al ligando C-terminale (LBD) privo di una tasca idrofobica convenzionale ma che espone una scanalatura elicoidale carica su H11/H12 per l'aggancio dei coregolatori tramite patch idrofobici. Costitutivamente attivo tramite sinergia AF-1/2, Nurr1 guida i programmi genici dopaminergici (tirosina idrossilasi, VMAT2, DAT, Pitx3) tramite il looping della cromatina e la coattivazione CBP/p300 più l'eterodimerizzazione RXRα che amplifica la trascrizione agli elementi compositi NBRE-DR5, mentre le modificazioni post-traduzionali, la fosforilazione di ERK che migliora AF-1, la SUMOilazione a K185 che reprime tramite CtBP, la fosforilazione di GSK3β che interrompe l'interazione RXR, regolano finemente l'attività durante lo sviluppo e le risposte allo stress, accoppiandosi a Wnt/β-catenina per la proliferazione dei progenitori e a BDNF/TrkB per la neuroprotezione. Le mutazioni eterozigoti (R502X) causano Parkinsonismo ereditario con neuroni TH+ ridotti, mentre il declino legato all'età esacerba la perdita di DA nel PD sporadico, posizionando Nurr1. |
Informazioni sullutilizzo
| Applicazione | IHC | Diluizione |
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|---|---|---|---|---|---|
| Reattività | Rat | ||||
| Fonte | Mouse Monoclonal Antibody | MW | |||
| Tampone di conservazione | PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 | Conservazione (Dalla data di ricevimento) |
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years | ||
| IHC |
Experimental Protocol：
Deparaffinization/Rehydration
1. Deparaffinize/hydrate sections:
2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.
3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.
4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.
5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.
6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.
Staining
1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.
2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.
3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.
4. Wash sections in wash buffer for 5 min.
5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.
6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.
7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.
8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.
9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.
10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.
11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.
12. Immerse slides in dH2O.
13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.
14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.
15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.
16. Mount sections with coverslips and mounting medium.
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Riferimenti
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