NSC 23766 Trihydrochloride

NSC23766 è identificato per inserirsi in un solco superficiale di Rac1 noto per essere critico per la specificazione del GEF. NSC23766 inibisce efficacemente il legame e l'attivazione di Rac1 da parte dei GEF specifici di Rac Trio o Tiam1 in modo dose-dipendente senza interferire con il legame o l'attivazione di Cdc42 o RhoA strettamente correlati da parte dei rispettivi GEF o con l'interazione di Rac1 con BcrGAP o l'effettore PAK1. [1]

NSC 23766 è attivo nella regolazione delle funzioni di Rac GTPase sul citoscheletro e su molte funzioni cellulari, inclusi il Cell Cycle, la crescita cellulare, l'adesione, la migrazione e la trascrizione genica. NSC 23766 (50 μM) blocca potentemente l'attivazione di Rac1 indotta dal siero o dal fattore di crescita derivato dalle piastrine e la formazione di lamellipodi senza influenzare l'attività di Cdc42 o RhoA endogeni nelle cellule NIH 3T3. NSC 23766 riduce la crescita delle cellule NIH 3T3 stimolata da Trio o Tiam1, ma non da Vav, Lbc, Intersectin o da un mutante di Rac1 costitutivamente attivo, e sopprime la trasformazione cellulare indotta da Trio, Tiam1 o Ras. NSC23766 inibisce in modo dose-dipendente la proliferazione delle cellule PC-3 e la crescita indipendente dall'ancoraggio. 25 μM di NSC23766 inibiscono l'invasione delle cellule PC-3 attraverso il Matrigel dell'85%. [1] 50 μM di NSC 23766 inibiscono l'attivazione indotta dalla trombina di Rac1 e Rac2 nelle piastrine umane, così come l'aggregazione piastrinica. [2]

NSC23766 previene la produzione di Aβ40 e Aβ42 nelle cellule swAPP-HEK293 senza influenzare Notch e sAPPα. NSC23766 previene l'attività della γ-secretasi nella cellula, ma non agisce come un inibitore diretto della γ-secretasi. NSC23766 riduce in modo dose-dipendente i livelli di Aβ40 secreto e intracellulare con un IC50 di 48,94 μM. 50 μM di NSC 23766 inibiscono il rilascio di Aβ42 del 57,97 %. [3]

NSC23766 regola l'espressione della ossido nitrico sintasi endoteliale e la funzione endoteliale. 100 μM di NSC23766 reprimono l'attività del promotore di eNOS del 60% nelle EC aortiche bovine e del 30% al 35% nelle cellule bEND.3. L'inibizione di Rac1 con NSC23766 destabilizza l'mRNA di eNOS e ne accorcia l'emivita a 17 ore. NSC23766 attenua in modo dose-dipendente il rilassamento indotto da ACh degli anelli aortici di topi wild-type. [4]

NSC23766 inibisce la crescita cellulare e induce l'apoptosi. NSC23766 diminuisce la vitalità delle cellule MDA-MB-468 e MDA-MB-231 in modo dose-dipendente con un IC50 di ~10 μM, che non è correlato allo stato del recettore degli estrogeni (ER), del recettore del progesterone (PR), di Her2 e della mutazione p53. NSC23766 ha scarso effetto sulla sopravvivenza delle cellule epiteliali mammarie normali MCF12A. Dopo 24 ore di esposizione a NSC 23766, le cellule MDA-MB-231 hanno mostrato un aumento dal 41% al 65% nella fase G1 e una concomitante diminuzione nelle fasi S e G2-M. 100 μM di NSC23766 inducono un aumento di sei volte delle MDA-MB-468 apoptotiche. L'inibizione di NSC23766 sull'arresto del Cell Cycle o sull'apoptosi nelle cellule di cancro al seno è mediata dalla down-regolazione della ciclina D1, della survivina e dell'inibitore dell'apoptosi legato al cromosoma X. [5]

NSC23766 induce la mobilizzazione delle cellule staminali/progenitrici ematopoietiche. La somministrazione intraperitoneale di NSC23766 (2,5 mg/kg) nel ceppo di topo C57Bl/6 «scarsamente mobilizzante» porta a un aumento di due volte delle cellule staminali/progenitrici ematopoietiche circolanti 6 ore dopo l'iniezione. [2]

NSC23766 allevia il danno polmonare acuto indotto da lipopolisaccaridi nei topi. Il trattamento con NSC23766 a 1 o 3 mg/kg non solo riduce l'infiltrazione delle cellule infiammatorie e le attività della MPO, ma inibisce anche l'espressione di mRNA dei mediatori pro-infiammatori, il fattore di necrosi tumorale-α e l'interleuchina-1β. NSC23766 riduce anche l'accumulo di Evans Blue e albumina nei polmoni sottoposti a LPS. [6]

• Saggio di attività di Rho GTPase

  Le cellule vengono coltivate in fase logaritmica in una piastra da 10 cm e vengono private di siero in un terreno con 0,5% di siero o indicato altrimenti per 24 ore prima della lisi in un tampone contenente 20 mM Tris HCl (pH 7,6), 100 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 1% Nonidet P-40, 10% glicerolo e una miscela di inibitori di proteasi 1×. I lisati vengono chiarificati, le concentrazioni proteiche vengono normalizzate e il Rac1 legato al GTP nei lisati viene misurato mediante un saggio di pull-down del dominio effettore. Per il saggio di pull-down di His6-PAK1 PBD, i lisati cellulari vengono incubati con il dominio His6-PAK1 PBD immobilizzato su Ni2+-agarosio (~1 μg ciascuno) purificato da E. coli per 30 min. I coprecipitati di Ni2+-agarosio vengono lavati due volte nel tampone di lavaggio e analizzati mediante immunoblotting con anticorpo monoclonale anti-Rac1.

• Linee cellulari

  Human breast cancer cells MDA-MB-468

• Concentrazioni

  0-100 μM

• Tempo di incubazione

  2 days

• Metodo

  Cells (1.5 × 10⁴/mL) are seeded in each well of 96-well tissue culture plates with 200 μL of medium. After 24 hours of plating, the medium is replaced with 200 μL of fresh medium containing NSC23766 at the indicated concentrations. At the end of the treatment period 20 μL of MTS solution are added to each well and incubated at 37 ℃ for 2 hours. Absorbance at 490 nm is read on a 96-well plate reader.

• Modelli animali

  Male ICR mic

• Dosaggi

  1 or 3 mg/kg

• Somministrazione

  i.p.