Nirogacestat (PF-03084014)

N. catalogoS8018 Lotto:S801805

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Dati tecnici

Formula

C27H41F2N5O
Peso molecolare 489.64 Numero CAS 1290543-63-3
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 98 mg/mL (200.14 mM)
Ethanol 49 mg/mL (100.07 mM)
Water Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.

 2.400mg/ml (4.90mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 48 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to make it clear; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione Nirogacestat (PF-03084014, PF-3084014) è un inibitore selettivo della gamma-secretase con IC50 di 6,2 nM in un saggio senza cellule e induce apoptosis. Fase 2.
Target
gamma-secretase
(cell-free assay)
6.2 nM
In vitro Il Nirogacestat (PF-03084014) inibisce la scissione del recettore Notch in saggi cellulari utilizzando cellule HPB-ALL che ospitano mutazioni sia nei domini di eterodimerizzazione che PEST in Notch1 con IC50 di 13,3 nM. Downregola l'espressione dei geni bersaglio di Notch Hes-1 e cMyc nelle cellule HPB-ALL con IC50 di <1 nM e 10 nM, rispettivamente, e inibisce la crescita cellulare di un sottogruppo di linee cellulari umane di T-ALL (HPB-ALL, DND-41, TALL-1 e Sup-T1) attraverso l'induzione dell'arresto del ciclo cellulare e dell'apoptosis con IC50 di 30–100 nM. Questo composto riduce la proliferazione delle HUVEC con IC50 di 0,5 μM e diminuisce la formazione del lume con un valore di IC50 di 50 nM. Esso (1 μM) non ha effetto antiproliferativo nelle cellule MX1; tuttavia, inibisce la migrazione del 95%.
In vivo Nirogacestat (PF-03084014) somministrato oralmente in una singola dose di 200 mg/kg provoca una inibizione massima di NICD di circa l'80% nei tumori di xenotrapianto HPB-ALL. Mostra una robusta attività antitumorale in questa modalità con una inibizione massima della crescita tumorale di circa il 92% a una dose di 150 mg/kg, accompagnata da una significativa riduzione della colorazione di NICD/Notch1, dell'indice mitotico tumorale (Ki67) e dell'apoptosis (caspasi-3 attivata). A 120 mg/kg, questo composto induce apoptosis, antiproliferazione, riduce la capacità di auto-rinnovamento delle cellule tumorali, compromette la vascolarizzazione tumorale e diminuisce l'attività metastatica in topi portatori di tumori di cancro al seno HCC1599. Il suo trattamento mostra una significativa attività antitumorale in vari tipi di modelli di xenotrapianto mammario con un valore TGI di almeno il 50%.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:[3]
  • saggio della γ-secretase

    Un frammento di DNA che codifica gli amminoacidi 596 - 695 dell'isoforma di 695 aa di APP (APP695) e la sequenza Flag (DYKDDDDK) al C-terminale viene generato mediante amplificazione PCR con oligonucleotidi opportunamente progettati e il cDNA di APP695. La Met che funge da sito di inizio della traduzione è il residuo 596 di APP695 (il residuo P1 rispetto al sito di clivaggio della β-secretase). Questo frammento di DNA viene inserito nel vettore di espressione procariotico pET2-21b. La proteina ricombinante, C100Flag, viene sovraprodotta in Escherichia coli [ceppo BL21(DE3)] e purificata mediante cromatografia su colonna Mono-Q. C100Flag (1,7 μM) viene incubato con membrane cellulari (0,5 mg/mL) in presenza di CHAPSO, CHAPS (3-[(3-colamidopropil)dimetilammonio]-1-propansolfonato) o Triton X-100 (0, 0,125, 0,25, 0,5 o 1%) in tampone B (50 mM Pipes, pH 7,0; 5 mM MgCl2; 5 mM CaCl2; 150 mM KCl) a 37°C. Le reazioni vengono interrotte aggiungendo RIPA (150 mM NaCl/1,0% NP-40/0,5% desossicolato di sodio; 0,1% SDS/50 mM Tris HCl, pH 8,0) e bollendo per 5 min. I campioni vengono centrifugati e le soluzioni del surnatante vengono saggiate per i peptidi Aβ mediante ECL. I prodotti correlati ad Aβ40 e Aβ42 derivanti dalla lavorazione mediata dalla γ-secretase di C100Flag possiedono una Met all'N-terminale e sono quindi definiti rispettivamente come M-Aβ40 e M-Aβ42. Analogamente, la soluzione del surnatante (0,125 mg/mL) da membrane cellulari HeLa estratte con CHAPSO (γ-secretase solubilizzata) viene incubata con C100Flag (1,7 μM) in tampone B contenente 0,25% di CHAPSO e successivamente saggiata per M-Aβ40 e M-Aβ42 utilizzando ECL. Questo composto, Nirogacestat (PF-03084014), è utilizzato nel contesto sperimentale.
Saggio cellulare:[1]
  • Linee cellulari

    Human T-ALL cell lines HPB-ALL

  • Concentrazioni

    ~1 μM

  • Tempo di incubazione

    7 days

  • Metodo

    Cells are seeded in 96-well plates at 10,000 cells/well in growth media supplemented with 10% fetal bovine serum. Serial dilutions of Nirogacestat (PF-03084014) are done in DMSO, appropriate controls or designated concentrations of this compound are added to each well, and cells are incubated at 37℃ for 7 days (final DMSO content 0.1%). Resazurin at a final concentration of 0.1 mg/mL is added to the cells and plates are incubated for 2 to 4 hours. Fluorescent signals are read as emission at 590 nm after excitation at 560 nm.
Studio sugli animali:[1]
  • Modelli animali

    Human T-cell acute lymphoblastic leukemia xenografts HPB-ALL

  • Dosaggi

    150 mg/kg

  • Somministrazione

    p.o. twice daily

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20530712/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22806875/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10801983/

Convalida del prodotto da parte del cliente

The expression of p-EGFR and NICD was assessed by western blot after treatment for 3 d.

Dati da [ , , Cell Prolif, 2018, 51(3):e12424 ]

(F) Tumour tissues were further analysed to detect the efficacy of the inhibitors by IHC staining using p-EGFR and Notch1. (4Fa) Notch1 staining was mostly confined on the cell membrane. (4Fc) After Erlotinib treatment, the Notch1 protein was cleaved and translocated to the nucleus. (4Fb) p-EGFR was overexpressed in the control group. (4Fd) Erlotinib treatment inhibited p-EGFR expression. (4Fe-f) PF-03084014 treatment reduced both Notch1 and p-EGFR expression. (4Fg-h) Synthetic therapy reduced the activation of Notch1 and EGFR pathway. Scale bar = 50 μm. *P < .05, **P < .01, ***P < .001

Dati da [ , , Cell Prolif, 2017, doi: 10.1111/cpr.12424 ]

Sellecks Nirogacestat (PF-03084014) È stato citato da 21 Pubblicazioni

Calorie restriction activates a gastric Notch-FOXO1 pathway to expand ghrelin cells [ J Cell Biol, 2024, 223(10)e202305093] PubMed: 38958606
Activation of the γ-secretase/NICD-PXR/Notch pathway induces Taxol resistance in triple-negative breast cancer [ Biochem Pharmacol, 2024, 230(Pt 2):116577] PubMed: 39427919
Multiomic analyses reveal new targets of polycomb repressor complex 2 in Schwann lineage cells and malignant peripheral nerve sheath tumors [ Neurooncol Adv, 2024, 6(1):vdae188] PubMed: 39620202
Inhibition of Notch Signaling Enhances Antitumor Activity of Histone Deacetylase Inhibitor LAQ824 [ Int J Mol Sci, 2023, 24(17)13660] PubMed: 37686467
Simultaneous Inhibition of Ceramide Hydrolysis and Glycosylation Synergizes to Corrupt Mitochondrial Respiration and Signal Caspase Driven Cell Death in Drug-Resistant Acute Myeloid Leukemia [ Cancers (Basel), 2023, 15(6)1883] PubMed: 36980769
In vitro effects of gamma-secretase inhibition in HPV-positive and HPV-negative head and neck squamous cell carcinoma [ Invest New Drugs, 2023, 41(2):193-201] PubMed: 36809443
Pharmacological conversion of gut epithelial cells into insulin-producing cells lowers glycemia in diabetic animals [ J Clin Invest, 2022, 132(24)e162720] PubMed: 36282594
DT7 peptide-modified lecithin nanoparticles co-loaded with γ-secretase inhibitor and dexamethasone efficiently inhibit T-cell acute lymphoblastic leukemia and reduce gastrointestinal toxicity [ Cancer Lett, 2022, 533:215608] PubMed: 35240234
BRAFV600E;K601Q metastatic melanoma patient-derived organoids and docking analysis to predict the response to targeted therapy [ Pharmacol Res, 2022, 182:106323] PubMed: 35752358
Chemical induction of gut β-like-cells by combined FoxO1/Notch inhibition as a glucose-lowering treatment for diabetes [ Mol Metab, 2022, 66:101624] PubMed: 36341906

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