NH125

N. catalogoS7436 Lotto:S743601

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Dati tecnici

Formula

C27H45IN2
Peso molecolare 524.56 Numero CAS 278603-08-0
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (190.63 mM)
Ethanol 100 mg/mL (190.63 mM)
Water Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione NH125 è un inibitore selettivo della eEF-2 chinasi con IC50 di 60 nM, >125 volte la selettività rispetto a PKC, PKA e CaMKII, ed è anche un potente inibitore della istidina chinasi.
Target
eEF-2 kinase
60 nM
In vitro Nelle cellule di glioma C6, NH125 diminuisce il contenuto cellulare di fosfo-eEF-2 senza influenzare il contenuto totale di eEF-2 e blocca il transito del ciclo cellulare al confine G1-S. Questo composto inibisce potentemente la vitalità cellulare di 10 cellule tumorali con IC50 che vanno da 0,7 a 4,8 μM. Inibisce efficacemente le istidina protein chinasi, inclusi Envz, PhoQ, BvgS, EvgS, e produce quindi potenti attività antibatteriche su Staphylococcus aureus resistente all'oxacillina (ORSA), Enterococcus faecalis resistente alla vancomicina (VRE), Streptococcus pneumoniae resistente alla penicillina (PRS) e altri batteri Gram-positivi e Gram-negativi. L'inibizione di EEF2K da parte di questa sostanza chimica rende le cellule tumorali più sensibili alla curcumina e al velcade, che possiedono un'azione inducente lo stress del RE.
In vivo NH125 riduce la pressione sanguigna nei ratti SHR e la produzione di ROS, l'induzione di molecole infiammatorie e l'ipertrofia nell'arteria mesenterica superiore dei ratti SHR.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:

[1]
  • Saggio della eEF-2 Chinasi

    L'attività della eEF-2 chinasi è misurata con due metodi: (a) un saggio basato su filtro; e (b) mediante immunoblotting utilizzando anticorpi anti-fosfo-eEF2. Per entrambi, le reazioni sono condotte in un volume totale di 20 μl contenente 50 mM HEPES (pH 7.5), 10 mM MgCl2, 1.5 mM CaCl2, 100 μg/ml di calmodulina, 2 μM di eEF-2 marcato con His e 400 nM di GST-eEF-2 chinasi, e miscela di ATP [50 μM ATP con 1 μCi (γ-33P)ATP]. La miscela di chinasi senza ATP viene preparata su ghiaccio e poi preincubata per 15 minuti a temperatura ambiente. Le reazioni di chinasi vengono avviate aggiungendo ATP e lasciate progredire a 30°C per 30 minuti. Per il saggio basato su filtro, la reazione viene terminata aggiungendo 20 μl di acido fosforico freddo all'1,5%, e 5 μl della reazione vengono applicati su carta fosfocellulosa P81 Whatman. La carta viene lavata tre volte in 500 ml di acido fosforico allo 0,5% e una volta con 200 ml di acetone. La carta viene quindi asciugata all'aria e immersa in 10 ml di miscela di scintillazione. La radioattività viene contata utilizzando un contatore a scintillazione liquida Beckton-Dickinson. Per l'immunoblotting, le reazioni vengono interrotte aggiungendo 20 μl di tampone Lamelli 3× [190 mM Tris (pH 6.8), 6% SDS, 30% glicerolo, 15% 2-mercaptoetanolo e 0,003% di colorante blu di bromofenolo]. I campioni vengono bolliti per 5 minuti e risolti mediante SDS-PAGE al 7% e processati per Western blotting come descritto di seguito. Le condizioni per entrambi i saggi sono scelte per garantire la linearità della reazione rispetto al tempo di incubazione e alla concentrazione dell'enzima.
Saggio cellulare:

[1]
  • Linee cellulari

    C6, T98-G, U-138 MG, U-87 MG, A172, A2780, HeLa, PC3, OVCAR-3, MCF-7 cell lines.

  • Concentrazioni

    ~10 μM

  • Tempo di incubazione

    48-72 hours

  • Metodo

    The viability of cells is measured using an MTT assay. Briefly, 5 × 104 cells are plated in 96-well plates and exposed to various concentrations of this compound for 48–72 h. The formazan product formed after 4 h incubation with MTT is dissolved in 100% DMSO and read at 550 nM using a Dynatech Microplate Reader MR5000.
Studio sugli animali:

[4]
  • Modelli animali

    Spontaneously hypertensive rats (SHR)

  • Dosaggi

    ~500 μg/kg/day

  • Somministrazione

    s.c.

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14583488/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10830522/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23182879/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23812389/

Convalida del prodotto da parte del cliente

MDA-MB-231 or T47D cells were pretreated with 300 nM NH125 for 1 h, followed by treatment with 8 μM TBMS1 for 24 h. The protein levels were measured by Western blot.

Dati da [ , , Acta Pharmacol Sin, 2018, doi：10.1038/s41401-018-0165-9 ]

NH125 sensitizes NPC cells to lapatinib. NPC cells were treated with lapatinib or DMSO for 48 h in the presence or absence of 0.25 μM NH125. Cell viability was assessed by the CCK-8 assay. Results are expressed as means±standard deviation. *, P<0.05;**, P<0.01 and ***, P<0.001.

Dati da [ , , BMC Cancer, 2016, 16(1):813. ]

CNE-2 cultured in medium supplemented with 10% FBS was treated with a series of concentrations of MK-2206 for 72 hours in the presence or absence of 20 μM HCQ and 0.25 μM NH125. Cleaved caspase-3 was measured by Western blotting, and β-actin was used as a loading control.

Dati da [ , , Drug Des Devel Ther, 2018, 12:2655-2663 ]

Sellecks NH125 È stato citato da 3 Pubblicazioni

Tubeimoside-1, a triterpenoid saponin, induces cytoprotective autophagy in human breast cancer cells in vitro via Akt-mediated pathway [Jiang SL Acta Pharmacol Sin, 2018, 10.1038/s41401-018-0165-9] PubMed: 30315250
Inhibiting eEF-2 kinase-mediated autophagy enhanced the cytocidal effect of AKT inhibitor on human nasopharyngeal carcinoma [Zhao YY Drug Des Devel Ther, 2018, Drug Des Devel Ther] PubMed: 30214154
Inhibition of eEF-2 kinase sensitizes human nasopharyngeal carcinoma cells to lapatinib-induced apoptosis through the Src and Erk pathways [Liu L, et al. BMC Cancer, 2016, 16(1):813] PubMed: 27756261

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