Scheda tecnica

Descrizione biologica

Specificità	NCX1 Antibody [C23J23] rileva i livelli endogeni della proteina NCX1 totale.
Contesto	NCX1 (scambiatore sodio-calcio 1) è una proteina di membrana integrale espressa ubiquitariamente, cruciale per l'omeostasi del Ca²⁺ cellulare, in particolare nel cuore e nel cervello, dove scambia il Ca²⁺ intracellulare con il Na⁺ extracellulare per regolare l'accoppiamento eccitazione-contrazione e la segnalazione neuronale. Strutturalmente, NCX1 contiene nove segmenti transmembrana con due regioni a ripetizione α (coinvolte nel legame e nel trasporto ionico) e un'ampia ansa intracellulare tra i TMS 5-6 che ospita regioni a ripetizione β che legano il Ca²⁺ regolatore. Esiste in multiple varianti di splicing con fenotipi regolatori tessuto-specifici, con NCX1.1 che è l'isoforma cardiaca predominante. La funzione di NCX1 è modulata da fattori locali, concentrazioni ioniche, lipidi e fosforilazione da parte di chinasi come PKA e PKC all'interno di un complesso macromolecolare contenente mAKAP, fosfatasi (PP1, PP2A) e altre proteine regolatorie. Nei cardiomiociti, questa organizzazione consente una precisa regolazione β-adrenergica, sebbene alterazioni come l'iperfosforilazione e la responsività attenuata si verifichino nell'insufficienza cardiaca, evidenziandone l'importanza sia in condizioni fisiologiche che patologiche.

Specificità

NCX1 Antibody [C23J23] rileva i livelli endogeni della proteina NCX1 totale.

Contesto

NCX1 (scambiatore sodio-calcio 1) è una proteina di membrana integrale espressa ubiquitariamente, cruciale per l'omeostasi del Ca²⁺ cellulare, in particolare nel cuore e nel cervello, dove scambia il Ca²⁺ intracellulare con il Na⁺ extracellulare per regolare l'accoppiamento eccitazione-contrazione e la segnalazione neuronale. Strutturalmente, NCX1 contiene nove segmenti transmembrana con due regioni a ripetizione α (coinvolte nel legame e nel trasporto ionico) e un'ampia ansa intracellulare tra i TMS 5-6 che ospita regioni a ripetizione β che legano il Ca²⁺ regolatore. Esiste in multiple varianti di splicing con fenotipi regolatori tessuto-specifici, con NCX1.1 che è l'isoforma cardiaca predominante. La funzione di NCX1 è modulata da fattori locali, concentrazioni ioniche, lipidi e fosforilazione da parte di chinasi come PKA e PKC all'interno di un complesso macromolecolare contenente mAKAP, fosfatasi (PP1, PP2A) e altre proteine regolatorie. Nei cardiomiociti, questa organizzazione consente una precisa regolazione β-adrenergica, sebbene alterazioni come l'iperfosforilazione e la responsività attenuata si verifichino nell'insufficienza cardiaca, evidenziandone l'importanza sia in condizioni fisiologiche che patologiche.

Informazioni sullutilizzo

Applicazione

IHC, FCM

Diluizione

IHC	FCM
1:200	1:20 - 1:100

Reattività

Human

Fonte

Mouse Monoclonal Antibody

MW

Tampone di conservazione

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

Conservazione
(Dalla data di ricevimento)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

Metodi sperimentali
IHC	Experimental Protocol： Deparaffinization/Rehydration 1. Deparaffinize/hydrate sections: 2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each. 3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each. 4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each. 5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each. 6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min. Staining 1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each. 2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min. 3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 4. Wash sections in wash buffer for 5 min. 5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature. 6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C. 7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each. 8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature. 9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each. 10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use. 11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity. 12. Immerse slides in dH2O. 13. If desired, counterstain sections with hematoxylin. 14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each. 16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Metodi sperimentali

IHC

Experimental Protocol：

Deparaffinization/Rehydration

1. Deparaffinize/hydrate sections:

2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.

3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.

4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.

5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.

6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.

Staining

1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.

2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.

3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

4. Wash sections in wash buffer for 5 min.

5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.

6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.

7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.

8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.

9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.

10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.

11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.

12. Immerse slides in dH2O.

13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.

14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.

16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Riferimenti

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12754202/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17303833/

Dati di applicazione

IHC

Validato da Selleck

Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human gastric cancer tissue with F2381 at 1:1000 dilution.