Scheda tecnica

Descrizione biologica

Specificità	Monocyte + Macrophage Antibody [E17C4] rileva i livelli endogeni dell'antigene totale Monocyte + Macrophage. Questo anticorpo riconosce un antigene intracellulare di macrofagi e monociti di topo. Reagisce fortemente con i macrofagi negli organi linfoidi in tutti i ceppi di topo.
Contesto	Monociti e macrofagi sono componenti essenziali del sistema immunitario innato, svolgendo un ruolo centrale nell'avvio e nel coordinamento delle risposte infiammatorie. Oltre a guidare la produzione di mediatori infiammatori e a modellare sia l'immunità innata che adattativa, sono altrettanto critici nel risolvere l'infiammazione e ripristinare l'omeostasi tissutale. La disregolazione della loro funzione è quindi una caratteristica comune nella patogenesi delle infezioni croniche, delle condizioni autoimmuni e delle gravi malattie infiammatorie sterili. I monociti, che rappresentano il 5-10% dei leucociti circolanti, sono cellule mononucleate derivate dal midollo osseo con una breve durata di vita di 1-3 giorni. In condizioni di stato stazionario, supportano l'omeostasi e mantengono la capacità di differenziarsi in macrofagi tissutali. Durante l'infiammazione, i monociti vengono attivamente reclutati nei siti interessati, dove si differenziano in macrofagi infiammatori o cellule dendritiche. I macrofagi sono distribuiti in tutti i tessuti del corpo e mostrano una notevole eterogeneità funzionale. Sono indispensabili per lo sviluppo tissutale, la sorveglianza immunitaria e il mantenimento dell'omeostasi locale. Molte popolazioni di macrofagi vengono stabilite durante l'embriogenesi, derivando dal sacco vitellino o dai progenitori epatici fetali, e possono persistere indipendentemente dal rifornimento di monociti in condizioni normali. Al contrario, i macrofagi in tessuti come la pelle, il cuore e l'intestino sono inizialmente seminati da progenitori embrionali ma vengono rapidamente sostituiti dopo la nascita da monociti derivati da cellule staminali ematopoietiche. È importante sottolineare che i macrofagi residenti nei tessuti possiedono sia capacità proliferativa che potenziale di auto-rinnovamento. L'attivazione e la polarizzazione sia dei monociti che dei macrofagi sono innescate dal loro riconoscimento di modelli molecolari associati a patogeni o a danni (PAMPs e DAMPs) tramite recettori di riconoscimento di pattern (PRRs), consentendo loro di adattare le loro risposte a una vasta gamma di segnali fisiologici e patologici.

Specificità

Monocyte + Macrophage Antibody [E17C4] rileva i livelli endogeni dell'antigene totale Monocyte + Macrophage. Questo anticorpo riconosce un antigene intracellulare di macrofagi e monociti di topo. Reagisce fortemente con i macrofagi negli organi linfoidi in tutti i ceppi di topo.

Contesto

Monociti e macrofagi sono componenti essenziali del sistema immunitario innato, svolgendo un ruolo centrale nell'avvio e nel coordinamento delle risposte infiammatorie. Oltre a guidare la produzione di mediatori infiammatori e a modellare sia l'immunità innata che adattativa, sono altrettanto critici nel risolvere l'infiammazione e ripristinare l'omeostasi tissutale. La disregolazione della loro funzione è quindi una caratteristica comune nella patogenesi delle infezioni croniche, delle condizioni autoimmuni e delle gravi malattie infiammatorie sterili. I monociti, che rappresentano il 5-10% dei leucociti circolanti, sono cellule mononucleate derivate dal midollo osseo con una breve durata di vita di 1-3 giorni. In condizioni di stato stazionario, supportano l'omeostasi e mantengono la capacità di differenziarsi in macrofagi tissutali. Durante l'infiammazione, i monociti vengono attivamente reclutati nei siti interessati, dove si differenziano in macrofagi infiammatori o cellule dendritiche. I macrofagi sono distribuiti in tutti i tessuti del corpo e mostrano una notevole eterogeneità funzionale. Sono indispensabili per lo sviluppo tissutale, la sorveglianza immunitaria e il mantenimento dell'omeostasi locale. Molte popolazioni di macrofagi vengono stabilite durante l'embriogenesi, derivando dal sacco vitellino o dai progenitori epatici fetali, e possono persistere indipendentemente dal rifornimento di monociti in condizioni normali. Al contrario, i macrofagi in tessuti come la pelle, il cuore e l'intestino sono inizialmente seminati da progenitori embrionali ma vengono rapidamente sostituiti dopo la nascita da monociti derivati da cellule staminali ematopoietiche. È importante sottolineare che i macrofagi residenti nei tessuti possiedono sia capacità proliferativa che potenziale di auto-rinnovamento. L'attivazione e la polarizzazione sia dei monociti che dei macrofagi sono innescate dal loro riconoscimento di modelli molecolari associati a patogeni o a danni (PAMPs e DAMPs) tramite recettori di riconoscimento di pattern (PRRs), consentendo loro di adattare le loro risposte a una vasta gamma di segnali fisiologici e patologici.

Informazioni sullutilizzo

Applicazione

IHC, FCM

Diluizione

Reattività

Mouse

Fonte

Rat Monoclonal Antibody

MW

Tampone di conservazione

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

Conservazione
(Dalla data di ricevimento)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

Metodi sperimentali
IHC	Experimental Protocol： Deparaffinization/Rehydration 1. Deparaffinize/hydrate sections: 2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each. 3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each. 4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each. 5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each. 6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min. Staining 1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each. 2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min. 3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 4. Wash sections in wash buffer for 5 min. 5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature. 6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C. 7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each. 8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature. 9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each. 10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use. 11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity. 12. Immerse slides in dH2O. 13. If desired, counterstain sections with hematoxylin. 14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each. 16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Metodi sperimentali

IHC

Experimental Protocol：

Deparaffinization/Rehydration

1. Deparaffinize/hydrate sections:

2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.

3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.

4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.

5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.

6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.

Staining

1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.

2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.

3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

4. Wash sections in wash buffer for 5 min.

5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.

6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.

7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.

8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.

9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.

10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.

11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.

12. Immerse slides in dH2O.

13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.

14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.

16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Riferimenti

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35741108/

Dati di applicazione

IHC

Validato da Selleck

Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded mouse carotid artery tissue with F3741 at 1:100 dilution.