Mocetinostat (MGCD0103)

Mocetinostat (MGCD0103) inibisce solo un sottoinsieme delle nove HDAC ricombinanti umane, incluse HDAC1, HDAC2, HDAC3 e HDAC11 a concentrazioni nanomolari o micromolari basse, in modo dose-dipendente. Rivela la più potente attività inibitoria contro gli enzimi HDAC1 e HDAC2 umani in vitro e non inibisce le HDAC di classe II. Il gruppo amminico esociclico in questo composto è necessario per l'attività inibitoria dell'enzima perché l'attività inibitoria di HDAC contro HDAC1 e HDAC2 è completamente abolita con l'analogo desamminico. La sua attività inibitoria raggiunge il plateau massimo a 6 μM, e il pool enzimatico massimo inibibile influenzato da MGCD0103 è il 75% dell'attività enzimatica totale nelle cellule HCT116, mentre NVP-LAQ824 inibisce quasi il 100% di quella in queste cellule. Nelle cellule A549, mostra anche un'inibizione dose-dipendente dell'attività HDAC nelle cellule intere. [1]

Mocetinostat (MGCD0103) inibisce significativamente la crescita di xenotrapianti tumorali umani in topi nudi e l'attività antitumorale correlata all'induzione dell'acetilazione degli istoni nei tumori. L'amministrazione P.O. di questo composto (sale 2HBr) diminuisce significativamente la crescita dei tumori A549 avanzati impiantati in topi nudi in modo dose-dipendente dopo 13 giorni di somministrazione giornaliera. Esso (170 mg/kg per il sale 2HBr, corrispondente a 120 mg/kg di base libera) blocca significativamente la crescita dei tumori rispetto al solo trattamento con veicolo senza alcun cambiamento di peso corporeo. Inoltre, non riduce il numero di globuli bianchi ed è ben tollerato. Il composto è anche attivo per via orale in molti altri modelli di xenotrapianto tumorale umano, incluso l'NSCLC H1437. A 80 mg/kg (base libera), blocca quasi completamente la crescita dei tumori H1437 dopo 13 giorni di somministrazione giornaliera p.o. senza riduzione del peso corporeo negli animali. [1] Riduce la pressione arteriosa polmonare in modo più drammatico. Inoltre, questo composto migliora il tempo di accelerazione dell'arteria polmonare e riduce l'incavo sistolico dell'inviluppo del flusso dell'arteria polmonare, il che suggerisce un impatto positivo dell'inibitore di HDAC sul rimodellamento e l'irrigidimento vascolare polmonare. [2]

• Saggio enzimatico HDAC in vitro

  Il saggio enzimatico della deacetilasi si basa su un saggio omogeneo di rilascio di fluorescenza. Gli enzimi HDAC ricombinanti purificati vengono incubati con Mocetinostat (MGCD0103) diluito in varie concentrazioni per 10 minuti in tampone di saggio [25 mM HEPES (pH 8.0), 137 mM NaCl, 1 mM MgCl₂, 2.7 mM KCl] a temperatura ambiente. Il substrato Boc-Lys(ε-Ac)-AMC viene aggiunto alla reazione per un'ulteriore incubazione a 37 °C. La concentrazione del substrato e il tempo di incubazione variano per i diversi isotipi di enzimi HDAC. Un'incubazione con tripsina di 20 minuti a temperatura ambiente consente il rilascio del fluoroforo dal substrato deacetilato. Il segnale fluorescente viene rilevato da un fluorimetro con eccitazione a 360 nm, emissione a 470 nm e cut-off a 435 nm.

• Linee cellulari

  Human mammary epithelial cells (HMEC), human foreskin fibroblasts (MRHF) cells

• Concentrazioni

  0-60 μM

• Tempo di incubazione

  72 hours

• Metodo

  Human mammary epithelial cells (HMEC) and human foreskin fibroblasts (MRHF) cells in 96-well plates are incubated with Mocetinostat (MGCD0103) at various concentrations for 72 hours at 37 °C in 5% CO₂. MTT is added at a final concentration of 0.5 mg/ml and incubated with the cells for 4 hours before an equal volume of solubilization buffer is added. After overnight incubation, solubilized dye is quantified by reading at 570 nm using a reference at 630 nm. Absorbance values are converted to cell numbers according to a standard growth curve of the relevant cell line. The concentration which reduces cell numbers to 50% relative to DMSO-treated cells is determined as MTT IC5

• Modelli animali

  Female CD-1 nude mice bearing H1437 tumors

• Dosaggi

  80 mg/kg

• Somministrazione

  Administered via p.o.