MK-2206 Dihydrochloride

MK-2206 2HCl è un inibitore allosterico ed è attivato dal dominio di omologia della pleckstrina. Questo composto inibisce l'autofosforilazione di Akt T308 e S473. Previene anche la fosforilazione mediata da Akt delle molecole di segnalazione a valle, tra cui TSC2, PRAS40 e le proteine ribosomiali S6. [1] Questa sostanza chimica inibisce le linee cellulari Ras wild-type (WT) (A431, HCC827 e NCI-H292) più potentemente rispetto alle linee cellulari mutanti Ras (NCI-H358, NCI-H23, NCI-H1299 e Calu-6). Mostra anche risposte sinergiche in combinazione con agenti citotossici nelle cellule tumorali polmonari NCI-H460 o ovariche A2780. [2] MK-2206 o l'inibizione di Akt mediata da siRNA attiva fortemente l'autophagy nelle cellule di glioma umano. Tuttavia, il silenziamento del fattore di allungamento eucariotico-2 (eEF-2) sopprime l'autophagy indotta da questo composto, con una promozione della morte cellulare apoptotica. [3]

MK-2206 2HCl mostra il 60% di TGI e inibisce più del 70% di fosfo-Akt1/2 (T308 e S473) in xenotrapianti di cancro ovarico A2780 a una dose di 240 mg/kg. [1] Questo composto mostra una significativa attività antitumorale in xenotrapianti NCI-H292 in combinazione. [2]

• Saggio delle chinasi Akt

  Le chinasi Akt vengono saggiate mediante un substrato peptidico biotinilato derivato da GSK. L'entità della fosforilazione del peptide viene determinata mediante Homogeneous Time Resolved Fluorescence (HTRF) utilizzando un anticorpo monoclonale accoppiato a un chelato di lantanidi (Lance) specifico per il fosfopeptide in combinazione con un fluoroforo di alloficocianina legata a streptavidina (SA-APC) che si legherà alla porzione biotinica del peptide. Quando Lance e APC sono in prossimità, ha luogo un trasferimento di energia non radiativo da Lance ad APC, seguito dall'emissione di luce da APC a 655 nm. Tampone di saggio 10X: 500 mM HEPES, pH 7,5, 1% PEG, 16,6 mM EDTA, 1 mM EGTA, 1% BSA, 20 mM 9-glicerolo fosfato; Tampone di spegnimento: 50 mM HEPES pH 7,3, 16,6 mM EDTA, 0,1% BSA, 0,1% Triton X-100, 0,17 nM di anticorpo monoclonale marcato, 0,0067 mg/mL SA-APC; Soluzione di lavoro ATP/MgCl₂: tampone di saggio 1X, 1 mM DTT, 1X PIC, 5% glicerolo, Akt attivo; Soluzione di lavoro peptidica: tampone di saggio 1X, 1 mM DTT, 1X PIC, 5% glicerolo, 2 TM peptide biotinilato GSK. La reazione viene assemblata aggiungendo 16 µL di soluzione di lavoro ATP/MgCl₂ ai pozzetti appropriati. Si aggiunge MK-2206 2HCl o veicolo (1,0 µL) seguito da 10 µL di soluzione di lavoro peptidica. La reazione viene avviata aggiungendo 13 μL della soluzione di lavoro enzimatica e miscelando. La reazione viene lasciata procedere per 50 min e quindi interrotta con l'aggiunta di 60 µL di tampone di spegnimento HTRF. Le reazioni interrotte vengono incubate a temperatura ambiente per almeno 30 min e quindi lette nello strumento.

• Linee cellulari

  A431, HCC827, NCI-H292, NCI-H358, NCI-H23, NCI-H1299, Calu-6 and NCI-H460 cells

• Concentrazioni

  0, 0.3, 1 and 3 μM

• Tempo di incubazione

  72 or 96 hours

• Metodo

  MK-2206 2HCl is dissolved in DMSO as a stock solution and diluted by culture media before use. Cells are seeded at a density of 2-3 × 10³ in 96-well plates and incubated for 24 hours. Then this compound (0, 0.3, 1 and 3 μM) is added to the cells. Cell proliferation is determined after 72 or 96 hours.

• Modelli animali

  SK-OV-3, NCI-H292, HCC70, PC-3, and NCI-H460 models in male CD1-nude mice

• Dosaggi

  120 mg/kg

• Somministrazione

  Orally administered