MG132

MG-132 mostra un'attività >1000 volte superiore a ZLLal nell'inibire l'attività di degradazione di ZLLL-MCA del proteasome 20S con IC50 di 100 nM rispetto a 110 μM. Questo composto inibisce anche la calpaina con IC50 di 1,2 μM. Questa sostanza chimica induce la crescita dei neuriti nelle cellule PC12 a una concentrazione ottimale di 20 nM, mostrando una potenza 500 volte superiore a ZLLal. [1] Questo composto (10 μM) inibisce potentemente l'attivazione di NF-κB indotta da TNF-α, la trascrizione genica di interleuchina-8 (IL-8) e il rilascio di proteine IL-8 nelle cellule A549 mediante l'inibizione della degradazione di IκBα mediata dal proteasome. [2] Questo trattamento chimico induce potentemente l'apoptosi dipendente da p53 nelle cellule KIM-2 mediante l'inibizione del proteasome 26S. [3] A differenza di BzLLLCOCHO o PS-341, il trattamento con questo composto provoca una debole inibizione delle attività simil-chimotripsina (CT-L) e idrolizzante peptidilglutamil peptide (PGPH) del proteasome 26S, mentre le cellule di mieloma multiplo (U266 e OPM-2) sono più sensibili all'induzione dell'apoptosi da parte di questa sostanza chimica rispetto a BzLLLCOCHO. [4] Questo composto (1 μM) sensibilizza le cellule di cancro alla prostata resistenti a TRAIL attivando i membri della famiglia AP-1 c-Fos e c-Jun, che, a loro volta, reprimono la molecola antiapoptotica c-FLIP(L). [5] Questa sostanza chimica aumenta significativamente la capacità dell'esafosfato di inositolo (IP6) di ridurre l'attività metabolica cellulare sia nelle linee cellulari di cancro alla prostata androgeno-indipendenti (AIPCa) PC3 che DU145. [6]

La somministrazione di MG-132 ripristina efficacemente i livelli di espressione e la localizzazione nella membrana plasmatica di distrofina, β-distroglicano, α-bdistroglicano e α-sarcoglicano nelle fibre muscolari scheletriche di topi mdx, riduce il danno della membrana muscolare e migliora i segni istopatologici della distrofia muscolare. [7] Il trattamento con questo composto riduce significativamente l'atrofia muscolare scheletrica indotta dall'immobilizzazione nei topi, mediante la regolazione verso il basso delle ligasi dell'ubiquitina specifiche del muscolo atrogin-1/MAFbx e dell'mRNA di MuRF-1. [8]

• Misurazione delle attività inibitorie di MG-132 contro il proteasome 20S

  La miscela di reazione per il saggio di inibizione del proteasome 20S contiene 0,1 M Tris-acetato, pH 7,0, proteasome 20S, MG-132 e 25 μM di substrato disciolto in dimetilsolfossido in un volume finale di 1 mL. Dopo incubazione a 37 °C per 15 minuti, la reazione viene interrotta con l'aggiunta di 0,1 mL di SDS al 10% e 0,9 mL di Tris acetato 0,1 M, pH 9,0. Viene misurata la fluorescenza dei prodotti di reazione. Per determinare l'IC50 contro il proteasome 20S, varie concentrazioni di questo composto sono incluse nella miscela di saggio.

• Linee cellulari

  KIM-2, HC11, and ES

• Concentrazioni

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~25 μM

• Tempo di incubazione

  24 and 48 hours

• Metodo

  Cells are exposed to various concentrations of MG-132 for 24, and 48 hours. Supernatant and monolayer cells are harvested by centrifugation and fixed in 70% ethanol in PBS for staining with acridine orange. Equal volumes of cells and acridine orange (5 mg/mL in PBS) are mixed on a microscope slide and examined by fluorescence microscopy. For annexin V analysis, cells are harvested by centrifugation and stained with annexin V and propidium iodide. For cell cycle analysis, cells are rehydrated in PBS at room temperature for 10 minutes, followed by staining with propidium iodide (5 mg/mL). All samples are analyzed using a Coulter Epics XL flow cytometer.

• Modelli animali

  Male mdx (C57BL/10ScSn DMD mdx) mice

• Dosaggi

  ~10 μg/kg/day

• Somministrazione

  Injection