Maraviroc (UK-427857)

Maraviroc inibisce il legame del γ-S-GTP stimolato da MIP-1β alle membrane delle cellule HEK-293, indicando la sua capacità di inibire la stimolazione chemiochina-dipendente dello scambio GDP-GTP al complesso CCR5/proteina G. Questo composto inibisce anche l'evento a valle della ridistribuzione intracellulare del calcio indotta da chemiochine, con IC50 che vanno da 7 a 30 nM ottenute contro MIP-1β, MIP-1α e RANTES. Negli stessi esperimenti, non innesca il rilascio di calcio intracellulare a concentrazioni fino a 10 μM, indicando che è privo di attività agonista del CCR5. Coerentemente con ciò, questa sostanza chimica non riesce a indurre l'internalizzazione del CCR5. È attiva a basse concentrazioni nanomolari contro HIV-1 Ba-L. Questo composto inibisce tutti i 200 virus pseudotipati con una IC90 media geometrica di 13,7 nM. [1] A concentrazioni >1000 volte la concentrazione inibitoria del 50%, non ha inibito altri recettori delle chemiochine (CCR1, 2, 3, 4, 7 e 8; CXCR1 e 2) in misura clinicamente rilevante[3].

I valori di emivita di Maraviroc sono di 0,9 ore nel ratto e 2,3 ore nel cane. Dopo somministrazione orale (2 mg/kg) al cane, il Cmax (256 ng/ml) si è verificato 1,5 ore dopo la dose e la biodisponibilità è del 40%. Per il ratto, circa il 30% della dose somministrata viene assorbita dal tratto intestinale. [1] Femmine di topi RAG-hu vengono sfidate vaginalmente con HIV-1 un'ora dopo l'applicazione intravaginale del gel composto. Questi topi trattati con gel sono completamente protetti contro la sfida vaginale da HIV-1, a differenza dei topi trattati con gel placebo che sono tutti diventati infetti. La somministrazione vaginale di questo composto protegge completamente i topi contro la sfida vaginale da HIV-1. Mentre c'è un chiaro schema di declino delle cellule T CD4 nei topi trattati con gel placebo e sfidati viralmente, i loro livelli sono stabili nei topi che ricevono questo gel chimico. [2]

• Inibizione del legame delle chemiochine al CCR5

  Il legame di MIP-1α, MIP-1β e RANTES marcati con ¹²⁵I al CCR5 viene misurato utilizzando cellule HEK-293 intatte che esprimono stabilmente il recettore o preparazioni di membrana di esse. In breve, le cellule vengono risospese in tampone di legame (50 mM HEPES contenente 1 mM CaCl₂, 5 mM MgCl₂ e 0,5% di albumina di siero bovino [BSA] e aggiustato a pH 7,4) a una densità di 2 × 10⁶ cellule/ml. Per le preparazioni di membrana, le cellule lavate con soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) vengono risospese in tampone di lisi (20 mM HEPES, 1 mM CaCl₂, 1 compressa COMPLETE per 50 mL, pH 7,4) prima dell'omogeneizzazione in un omogeneizzatore portatile Polytron, ultracentrifugazione (40.000× g per 30 min) e risospensione in tampone di legame a una concentrazione proteica di 0,25 mg/mL (12,5 μg di proteina di membrana viene utilizzata in ogni pozzetto di una piastra a 96 pozzetti). MIP-1α, MIP-1β e RANTES radiomarcati con ¹²⁵I vengono preparati e diluiti in tampone di legame a una concentrazione finale di 400 pM nel saggio. Le diluizioni di questo composto vengono aggiunte a ogni pozzetto per un volume finale di 100 μL, le piastre del saggio incubano per 1 ora e i contenuti vengono filtrati attraverso piastre Unifilter pre-bloccate e lavate che vengono contate dopo essiccazione notturna.

• Linee cellulari

  PHA-stimulated PBMC or PM-1 cells

• Concentrazioni

  0-1 μM

• Tempo di incubazione

  5 days or 7 days

• Metodo

  Drug susceptibility assays are performed in 24-well tissue culture plates. Duplicate eight-point dilution series of Maraviroc are prepared in DMSO and medium to yield a final DMSO concentration of 0.1% (vol/vol) in the assay. PHA-stimulated PBMC or PM-1 cells are infected with virus for 1 hour at 37 °C. Cells are subsequently washed once, and 3.6 × 10⁵ PBMC or 2.0 × 10⁵ PM-1 cells are added to each well of assay plates containing diluted this compound. Plates are incubated for 5 days (lab-adapted strains) or 7 days (primary isolates) at 37 °C in a humidified 5% CO₂ (vol/vol) atmosphere.

• Modelli animali

  Humanized BALB/c-Rag2−/−γc−/− and BALB/c-Rag1−/−γc−/− (RAG-hu) mice

• Dosaggi

  ~64 μg

• Somministrazione

  A 25 μL volume of the gel formulation is carefully applied in to the vaginal vault of mice.