E7080 (Lenvatinib)

E7080, in quanto potente inibitore dell'angiogenesi in vitro, mostra un effetto inibitorio significativo sulla segnalazione di VEGF/KDR e SCF/Kit. Secondo i saggi di recettore tirosina e serina/treonina chinasi in vitro, questo composto inibisce Flt-1, KDR, Flt-4 con IC50 di 22, 4,0 e 5,2 nM, rispettivamente. Oltre a queste chinasi, questo composto inibisce anche le Protein Tyrosine Kinase FGFR1 e PDGFR con valori di IC50 di 46, 51 e 100 nM per FGFR1, PDGFRα e PDGFRβ, rispettivamente. [1] Questo composto inibisce potentemente la fosforilazione di VEGFR2 (IC50, 0,83 nM) e VEGFR3 (IC50, 0,36 nM) nelle HUVEC che è stimolata da VEGF e VEGF-C, rispettivamente. [2] Uno studio recente mostra che il trattamento con questo composto (sia a 1 μM che a 10 μM) si traduce in una significativa inibizione della migrazione e dell'invasione cellulare inibendo la segnalazione di FGFR e PDGFR. [3]

Quando somministrato per via orale in un modello di xenotrapianto H146, Lenvatinib (E7080) inibisce la crescita del tumore H146 a 30 e 100 mg/kg in modo dose-dipendente e porta alla regressione tumorale a 100 mg/kg. Inoltre, questo composto a 100 mg/kg diminuisce la densità dei microvasi più del trattamento con anticorpo anti-VEGF e imatinib. [1] Inibisce significativamente la crescita tumorale locale in un modello di cuscinetto adiposo mammario (m.f.p.) MDA-MB-231 con RTV (volume tumorale calcolato al giorno 8/volume tumorale al giorno 1) di 0,81, e riduce sia l'angiogenesi che la linfangiogenesi dei noduli metastatici stabiliti del tumore MDA-MB-231 nei linfonodi. [2]

• Saggio chinasi in vitro [1]

  I saggi di Protein Tyrosine Kinase sono eseguiti mediante HTRF (KDR, VEGFR1, FGFR1, c-Met, EGFR) ed ELISA (PDGFRβ), utilizzando i domini chinasici ricombinanti dei recettori. In entrambi i saggi, 4 μL di diluizioni seriali di questo composto vengono miscelati in una piastra rotonda a 96 pozzetti con 10 μL di enzima, 16 μL di soluzione di poli (GT) (250 ng) e 10 μL di soluzione di ATP (1 μM ATP) (la concentrazione finale di DMSO è 0,1%). Nei pozzetti per i bianchi non viene aggiunto enzima. Nei pozzetti di controllo non viene aggiunto alcun articolo di prova. La reazione chinasica viene avviata aggiungendo la soluzione di ATP a ciascun pozzetto. Dopo 30 minuti di incubazione a 30°C, la reazione viene interrotta aggiungendo 0,5 M di EDTA (10 μL/pozzetto) alla miscela di reazione in ciascun pozzetto. Il tampone di diluizione adeguato a ciascun saggio chinasico viene aggiunto alla miscela di reazione. Nel saggio HTRF, 50 μL della miscela di reazione vengono trasferiti in una piastra EIA/RIA nera a 96 pozzetti con 1/2 area, viene aggiunta la soluzione HTRF (50 μL/pozzetto) alla miscela di reazione, e quindi l'attività chinasica viene determinata misurando la fluorescenza con un rivelatore di fluorescenza risolto nel tempo a una lunghezza d'onda di eccitazione di 337 nm e lunghezze d'onda di emissione di 620 e 665 nm. Nell'ELISA, 50 μL della miscela di reazione vengono incubati in piastre di polistirene a 96 pozzetti rivestite di avidina a temperatura ambiente per 30 minuti. Dopo il lavaggio con tampone di lavaggio, viene aggiunta la soluzione PY20-HRP (70 μL/pozzetto) e la miscela di reazione viene incubata a temperatura ambiente per 30 minuti. Dopo il lavaggio con tampone di lavaggio, viene aggiunto il reagente TMB (100 μL/pozzetto) a ciascun pozzetto. Dopo diversi minuti (10-30 minuti), viene aggiunta 1 M H₃PO₄ (100 μL/pozzetto) a ciascun pozzetto. L'attività chinasica viene determinata misurando l'assorbanza a 450 nm con un lettore di micropiastre.

• Linee cellulari

  HUVECs

• Concentrazioni

  0-10 μM

• Tempo di incubazione

  72 hours

• Metodo

  HUVECs (1,000 cells in each well in serum-free medium containing 2% fetal bovine serum) and L6 rat skeletal muscle myoblasts (5,000 cells in each well in serum-free DMEM) are dispensed in a 96-well plate and incubated overnight. This compound and either VEGF (20 ng/mL) or FGF-2 (20 ng/mL) containing 2% fetal bovine serum and PDGFβ (40 ng/mL) are added to each well. Cells are incubated for 3 days and then the ratios of surviving cells are measured by WST-1 reagent. For proliferation assay, samples are duplicated and three separate experiments are done.

• Modelli animali

  H146 tumor cells are implanted subcutaneously (s.c.) into the flank region of female BALB/c nude mice.

• Dosaggi

  ≤100 mg/kg

• Somministrazione

  Administered via p.o.