KN-93 Phosphate

KN-93 inibisce la formazione di dopamina nelle cellule PC12h modulando la velocità di reazione della TH per ridurre i livelli di fosforilazione mediati da Ca(2+) della molecola TH. [1] KN-93 inibisce la crescita delle cellule fibroblastiche indotta dal siero con una IC50 di 8 μM e induce l'apoptosi dopo un arresto prolungato in G1. [2] KN-93 inibisce l'attività del recettore degli androgeni e induce la morte cellulare in modo indipendente da p53 nelle cellule di carcinoma prostatico. [3]

KN-93 (5 μg) migliora la discinesia indotta dalla levodopa abbassando l'espressione di pGluR1S845 in un modello di ratto della malattia di Parkinson. [4] Nei topi MRL/lpr Foxp3-GFP, KN-93 induce una significativa induzione di cellule Treg nella milza, nei linfonodi periferici e nel sangue periferico, e diminuisce i danni alla pelle e ai reni. [5]

• Misurazione delle attività della CaMKII autofosforilata/non autofosforilata

  L'attività di CaMKII viene misurata utilizzando syntideII come substrato. La CaMKII purificata viene pre-incubata nella miscela di saggio (35 mM Hepes-Na (pH 8,0), 10 mM MgCl₂, 0,5 μM CaM, 5 μM ATP, 1 mM CaCl₂ o 1 mM EGTA, totale 25 μL) a 30 °C per 2 minuti. Dopo questa pre-incubazione, la miscela substrato proteico/ATP radioattivo viene aggiunta alla stessa provetta e la preparazione viene ulteriormente incubata a 30 °C per 5 minuti (condizione di saggio finale; 35 mM Hepes-Na (pH 8,0), 10 mM MgCl₂, 0,125 μM CaCl₂, 20 μM syntideII, 11,25 μM [γ-³²P] ATP, 10 % DMSO e le concentrazioni indicate di KN-93, supplementato con 0,25 mM CaCl₂ e 2 mM EGTA (per campioni autofosforilati) o 0,25 mM EGTA e 2 mM CaCl₂ (per campioni non autofosforilati), totale 100 μL). La reazione viene terminata aggiungendo 25 μL di TCA ghiacciato al 100 % (p/v). Dopo centrifugazione, 80 μL del surnatante vengono applicati su carta fosfocellulosa. I filtri vengono quindi lavati con 75 mM H₃PO₄ per 15 minuti con agitazione continua. Dopo 4 cicli di lavaggio, la radioattività trattenuta sulla carta da filtro viene quantificata in uno scintillatore liquido.

• Linee cellulari

  NIH 3T3 fibroblasts

• Concentrazioni

  ~24 μM

• Tempo di incubazione

  70 hours

• Metodo

  NIH 3T3 fibroblasts are cultured on polystyrene dishes in DMEM and fetal bovine serum, supplemented with penicillin/streptomycmn in a 5% CO2 humidified chamber at 37 癈. Cell growth is measured by using the MTT dye reduction method.

• Modelli animali

  Sprague Dawley female rats

• Dosaggi

  ~5 μg

• Somministrazione

  Intrastriatal administration