Ivacaftor (VX-770)

Ivacaftor (VX-770) (10 μM) aumenta significativamente la secrezione di Cl^- stimolata dalla forskolina (I_T) di circa 4 volte con una EC50 di 100 nM nelle cellule tiroidee di ratto Fisher (FRT) ricombinanti che esprimono la mutazione di gating G551D di CFTR, e di circa 6 volte con una EC50 di 25 nM nelle cellule ricombinanti che esprimono la mutazione di processamento F508del corretta per la temperatura di CFTR. Coerentemente con gli aumenti nella I_T stimolata dalla forskolina, questo composto aumenta la probabilità di apertura (P_o) di CFTR G551D-, F508del- e wild-type di circa 6 volte, 5 volte e 2 volte, rispettivamente, indicando che agisce direttamente su CFTR per aumentare la sua attività di gating. In epiteli bronchiali umani (HBE) primari coltivati con CF che portano le mutazioni G551D e F508del di CFTR, Ivacaftor aumenta potentemente la I_T stimolata dalla forskolina di circa 10 volte, dal 5% a un livello massimo del 48% di quello misurato in HBE non-CF, con una EC50 di 236 nM, mostrando una potenza circa 70 volte maggiore rispetto alla genisteina, un potenziatore di CFTR comunemente usato, che ha una EC50 di 16 μM. In HBE con CFTR F508del omozigote, provoca un aumento significativo della I_T stimolata dalla forskolina con una EC50 di 22 nM, in misura minore dal 4% al 16% degli HBE non-CF rispetto all'effetto in HBE G551D/F508del. A causa della potenziamento di CFTR, questo composto inibisce l'eccessivo assorbimento di Na⁺ e fluidi mediato da ENaC con una IC50 di 43 nM, e diminuisce la risposta, con conseguente aumento del fluido superficiale e della frequenza di battito ciliare (CBF) in HBE G551D/F508del. [1]

• Registrazioni in camera di Ussing

  L'effetto di Ivacaftor (VX-770) sulla secrezione di Cl^- mediata da CFTR è caratterizzato misurando l'I_T mediata da CFTR in camere utilizzando cellule tiroidee di ratto Fisher (FRT) ricombinanti che esprimono G551D o F508del CFTR. Le cellule vengono coltivate su inserti per colture cellulari Costar Snapwell mantenuti a 37 °C prima della registrazione. Gli inserti per colture cellulari vengono montati in una camera di Ussing per registrare l'I_T in modalità voltage-clamp (V_hold = 0 mV). Per le cellule FRT, la membrana basolaterale è stabilita con un gradiente di Cl^- basolaterale-apicale. La soluzione di bagno basolaterale contiene 135 mM NaCl, 1,2 mM CaCl₂, 1,2 mM MgCl₂, 2,4 mM K₂HPO₄, 0,6 mM KHPO₄, 10 mM N-2-idrossietilpiperazina-N

• Linee cellulari

  FRT and NIH 3T3 cells

• Concentrazioni

  100/25 nM

• Tempo di incubazione

  24 h

• Metodo

  Cells were treated with various concentrations of Ivacaftor (VX-770).

• Modelli animali

  Male Sprague-Dawley rats

• Dosaggi

  3 mg/kg

• Somministrazione

  i.v.