Capmatinib (INC280)

INCB28060 mostra una potenza enzimatica picomolare ed è altamente specifico per c-MET con una selettività superiore a 10.000 volte rispetto a un ampio pannello di chinasi umane. Questo composto inibisce la fosforilazione di c-MET umano e la segnalazione mediata da c-MET nelle cellule tumorali. Inibisce la proliferazione e la sopravvivenza cellulare dipendenti da c-MET e previene la crescita e la migrazione delle cellule tumorali indipendenti dall'ancoraggio. [1]

INCB28060 mostra una forte attività antitumorale nei modelli tumorali di topo dipendenti da c-MET, anche il trattamento orale di 0,03 mg/kg di questo composto provoca circa il 50% di inibizione della fosforilazione di c-MET. Si osserva un'inibizione dose-dipendente della crescita tumorale nei topi portatori di tumore. [1]

• Saggio della chinasi c-Met

  Il tampone del saggio contiene 50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl₂, 100 mM NaCl, 0,1 mg/ml BSA, 5mM DTT, pH 7,8. Per HTS, 0,8 μL di 5 mM di questo composto disciolto in DMSO vengono puntinati su piastre a 384 pozzetti. La titolazione del DMSO suggerisce che la concentrazione massima tollerata del solvente è del 4%. Per misurare le IC50, la piastra INCB28060 viene preparata mediante diluizioni seriali 3 volte e a 11 punti. 0,8 μL di questa sostanza chimica in DMSO vengono trasferiti dalla piastra INCB28060 alla piastra del saggio. La concentrazione finale di DMSO è del 2%. Soluzioni di 8 nM di c-Met non fosforilato o 0,5 nM di c-Met fosforilato vengono preparate nel tampone del saggio. Una soluzione madre di 1 mM del substrato peptidico Biotin-EQEDEPEGDYFEWLE-amide disciolto in DMSO viene diluita a 1 μM nel tampone del saggio contenente 400 μM ATP (c-Met non fosforilato) o 160 uM ATP (c-Met fosforilato). Un volume di 20 μL di soluzione enzimatica (o tampone del saggio per il bianco enzimatico) viene aggiunto ai pozzetti appropriati in ciascuna piastra e quindi 20 μL/pozzetto di soluzione di substrato per iniziare la reazione. La piastra viene protetta dalla luce e incubata a 25 °C per 90 minuti. La reazione viene interrotta aggiungendo 20 μL di una soluzione contenente 45 mM EDTA, 50 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 0,4 mg/ml BSA, 200 nM SA-APC e 3 nM EUPy20. La piastra viene incubata per 15-30 minuti a temperatura ambiente e l'HTRF (fluorescenza omogenea risolta nel tempo) viene misurata su uno strumento Perkin Elmer Fusion α-FP. Le impostazioni del programma HTRF utilizzate sono le seguenti: Filtro di eccitazione primario 330/30, Finestra primaria: 200 μSec, Ritardo primario: 50 μSec, Numero di flash: 15, Tempo di lettura del pozzetto: 2000

• Linee cellulari

  H441 cells

• Concentrazioni

  0.24, 1, 4, 16, 63 nM

• Tempo di incubazione

  24 hours

• Metodo

  H441 cells are seeded in RPMI-1640 medium containing 10% FBS and grown to complete confluence. Gaps are introduced by scraping cells with a P200 pipette tip. Cells are then stimulated with 50 ng/mL recombinant human HGF to induce migration across the gap in the presence of various concentrations of this compound. After an overnight incubation, representative photographs are taken and a semiqualitative assessment of inhibition of cell migration is conducted.

• Modelli animali

  Eight-week-old female Balb/c nu/nu mice (Charles River) are inoculated subcutaneously with 4 × 10⁶ tumor cells (S114 model) or with 5 × 10⁶ tumor cells (U-87MG glioblastoma model).

• Dosaggi

  3, 10, 30 mg/kg

• Somministrazione

  INCB28060 is orally dosed, twice each day.