ICG-001

ICG-001 non ha alcun effetto sul costrutto reporter correlato, FOPFLASH, che contiene siti TCF mutati. Dopo il trattamento con 25 μM di questo composto per 8 ore, le cellule SW480 riducono i livelli di stato stazionario di RNA e proteina di Survivina e Ciclina D1, entrambi i quali possono essere sovraregolati dalla β-catenina. Questo composto induce selettivamente l'apoptosi nelle cellule trasformate ma non nelle cellule normali del colon, riduce la crescita in vitro delle cellule di carcinoma del colon. [1] Può salvare fenotipicamente la differenziazione neuronale indotta dal fattore di crescita nervoso (NGF) normale e la crescita dei neuriti nelle cellule mutanti di presenilina-1, sottolineando l'importanza della via di segnalazione TCF/β-catenina sulla crescita dei neuriti e la differenziazione neuronale. [2] Uno studio recente dimostra che 5 μM di questa sostanza chimica inibisce l'EMT indotta dalla leptina, l'invasione e la formazione di sfere tumorali nelle cellule MCF7. [3]

La somministrazione di un analogo idrosolubile di ICG-001 per 9 settimane riduce la formazione di polipi del colon e dell'intestino tenue del 42%, con la stessa efficacia dell'agente antinfiammatorio non steroideo, che ha costantemente dimostrato efficacia in questo modello. Non viene rilevata alcuna tossicità evidente durante il corso del trattamento. Nel modello di xenotrapianto di topo nudo SW620 di regressione tumorale, 150 mg/kg, i.v. di questo composto dimostra una drammatica riduzione del volume tumorale nel corso del trattamento di 19 giorni, senza mortalità o perdita di peso. [1] Questa sostanza chimica (5 mg/kg al giorno) inibisce significativamente la segnalazione della beta-catenina e attenua la fibrosi polmonare indotta dalla bleomicina nei topi, preservando contemporaneamente l'epitelio. [4]

• Saggio reporter DUAL-Luciferase

  Il sistema di saggio reporter Dual-Luciferase (DLR) fornisce un mezzo efficiente per eseguire saggi a doppio reporter. Nel saggio DLR^TM, le attività delle luciferasi di lucciola (Photinus pyralis) e Renilla (Renilla reniformis, nota anche come penna di mare) vengono misurate sequenzialmente da un singolo campione. Il reporter di luciferasi di lucciola viene misurato per primo aggiungendo il reagente del saggio di luciferasi II (LAR II) per generare un segnale luminescente di tipo “incandescente”. Dopo aver quantificato la luminescenza della lucciola, questa reazione viene spenta e la reazione della luciferasi di Renilla viene avviata aggiungendo simultaneamente il reagente Stop & Glo® alla stessa provetta. Il reagente Stop & Glo® produce anche un segnale di tipo “incandescente” dalla luciferasi di Renilla, che decade lentamente nel corso della misurazione. Nel sistema di saggio DLR^TM, entrambi i reporter producono saggi lineari con sensibilità subattomolari (<10-18) e nessuna attività endogena di entrambi i reporter nelle cellule ospiti sperimentali. Inoltre, il formato integrato del saggio DLR^TM consente una rapida quantificazione di entrambi i reporter sia nelle cellule trasfettate che nelle reazioni di trascrizione/traduzione acellulari.

• Linee cellulari

  Human colon carcinoma cell lines SW480, SW620, and HCT116, normal colonic epithelial cell line CCD-841Co

• Concentrazioni

  ~25 μM

• Tempo di incubazione

  24 hours

• Metodo

  1. Prior to starting the assay, prepare the Apo-ONE Caspase-3/7 Reagent, and mix thoroughly. 2. For best results, empirical determination of the optimal cell number, apoptosis induction treatment and incubation period for the cell culture system may be necessary. 3. Use identical cell numbers and volumes for the assay and the negative control samples. 4. Do not mix Apo-ONE Caspase-3/7 Reagent and samples by manual pipetting. Mixing in this manner is unnecessary and may create bubbles that interfere with fluorescence readings or cross-contaminate the samples. Gentle mixing may be performed using a plate shaker. 5. Total incubation time for the assay depends upon the amount of caspase- 3/7 present in the sample. 6. The Apo-ONE Caspase-3/7 Reagent is formulated to mediate cellular lysis and support optimal caspase-3/7 activity. In rare instances, the reagent does not affect complete lysis of cultured cells. In such cases, lysis is enhanced by a freeze-thaw cycle. For best results, freeze at -70 °C, then thaw at room temperature. After equilibration, mix to homogeneity and incubate until measurable fluorescence is achieved

• Modelli animali

  C57BL/6 and nude mice tumor models

• Dosaggi

  20 mg/ kg

• Somministrazione

  i.p.